[发明专利]一种基于表面增强拉曼的血细胞快速检测方法

说明书

本发明公开了一种基于表面增强拉曼的血细胞快速检测方法，该方法基于表面增强拉曼（SERS）检测技术，对临床血样进行快速诊断和分析，可以快速判断被检测红细胞的成分和结构变化，该检测方法的灵敏度更高、更稳定，大大减少了外界温度、样品本身的影响，使检测更便捷，并且单次测量成本较低，极大节省了测量成本。

技术领域

本发明涉及一种基于表面增强拉曼的血细胞快速检测方法，特别涉及一种测量红细胞结构的方法。

背景技术

红细胞也称红血球，是血液中数量最多的一种血细胞，同时也是脊椎动物体内通过血液运送氧气的最主要的媒介，同时还具有免疫功能。红细胞通过分解葡萄糖释放能量。运输氧气和一部分二氧化碳。运输二氧化碳时呈暗紫色，运输氧气时呈鲜红色。此外，红细胞具有以下免疫功能：识别携带抗原；清除循环中免疫复合物；增强T细胞依赖反应；促进吞噬作用等。

目前对于红细胞的检测方法，即血常规检查，需要将红细胞稀释液为Hayem液，此类方法不仅操作复杂，还对操作仪器的人员素质以及仪器本身的性能要求较高。并且检测费时，运行费用较高。表面增强拉曼而且传统的检测方法在检测时，SERS基底需要使用化学还原法制备金或银溶胶，其制备过程中对温度、各组分的配比以及配置的时长要求精确控制，由于其条件控制难以准确量化，导致每次制备的金、银纳米颗粒粒径和分散性无法准确一致，获得的基底重复性较差。在使用液态SERS基底时，需要对制备的纳米颗粒进行反复清洗，操作过程复杂，且在检测中容易受外界温度、样品本身的性质影响，难以便捷定性及定量检测。

目前关于红细胞的检测，存在检测费用高、周期长、一次只能检测单一组分等问题。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供一种快速、灵敏检测红细胞的方法，该方法可以很简单及准确的对临床血样进行快速检测和分析。该种方法可以不经过分离步骤，直接检测。可以通过其表面增强拉曼信号来判断红细胞状态，而且检测时，不需要制备金或银溶胶的SERS基底，而是使用倾斜排列的银纳米棒阵列基底，可以使检测的灵敏度更高、更稳定，大大减少了外界温度、样品本身对检测的影响，使检测更便捷，操作过程简单。

为实现上述目的，本发明采用以下技术手段：

本发明提供一种基于表面增强拉曼的血细胞快速检测方法，包括以下步骤：

1.一种基于表面增强拉曼的血细胞快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

a. 使用动态阴影沉积的方法制备银纳米棒阵列基底；

b. 取0.2 mL血液样品，在血液样品加入0.5 ml Ph=7的磷酸缓冲溶液（PBS），并且混合均匀；

c. 将步骤b中的混合液静置1 min；

d. 取2 μL步骤c中得的溶液的滴加到银纳米棒阵列基底上，使所述溶液浓缩，得到检测液；

e. 将步骤d中得到的检测液进行拉曼散射检测，设置激光功率为30 mW，积分时间为10s，测得检测液的SERS光谱；

f. 根据步骤（e）中得到的检测液的SERS光谱，根据峰归属判断血液健康与否。

进一步的，所述步骤a中：将玻璃片切割成1cm× 1cm，加入乙醇在超声波清洗机中清洗5min，然后氮气吹干，固定在沉积室中；在压力小于5× 10^-7Torr真空沉积室中，通过电子束蒸发，在清洗干净的玻璃片上先后以0 .2nm/s和0 .3nm/s的速度先后沉积一层钛薄膜和银薄膜，然后旋转样品台使得基底法线与沉积方向夹角为86 °，通过电子束蒸发，以0.3nm/s的速度生长900nm厚的银纳米棒阵列。