[发明专利]一种β-半乳糖苷酶制备高纯度低聚半乳糖的方法

权利要求书

1.一种β-半乳糖苷酶制备高纯度低聚半乳糖的方法，其特征是包括以下步骤：

(1)游离β半乳糖苷酶通过转糖苷反应催化乳糖制备低聚半乳糖粗产品；

(2)制备乳酸克鲁维酵母全细胞发酵；

(3)通过乳酸克鲁维酵母全细胞纯化获得高纯度低聚半乳糖。

2.如权利要求1所述的方法，其特征是所述步骤(1)的方法是：使用pH＝5-9的50mM磷酸钠缓冲液将乳糖配置为100-500g/L的溶液，按1-45U/g乳糖的比例加入游离β-半乳糖苷酶酶液，在160-220rpm和25-40℃条件下，反应2-4h，获得GOS粗产品。

3.如权利要求1所述的方法，其特征是所用游离β-半乳糖苷酶为诺维信商业酶。

4.如权利要求1所述的方法，其特征是所述步骤2)的方法是：将乳酸克鲁维酵母菌株接种到种子液培养基中制备酵母种子液，然后以1：20的体积比向乳糖培养基加酵母种子液，在温度为30℃，搅拌转速为200rpm，pH值为7.5的条件下发酵制备全细胞，发酵时间为48h，最终获得浓度约为20g/L的全细胞发酵液，离心弃去上清液，收集菌体沉淀，获得乳酸克鲁维酵母全细胞。

5.如权利要求1所述的方法，其特征是乳酸克鲁维酵母购置于中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号为CICC1773。

6.如权利要求4所述的方法，其特征是所述的种子液培养基是每升培养基中含有5g酵母膏，10g蛋白胨和10g氯化钠。

7.如权利要求4所述的方法，其特征是所述的乳糖培养基是每升培养基中含有40g乳糖，10g酵母膏和10g蛋白胨。

8.如权利要求1所述的方法，其特征是所述步骤(3)的方法是：将步骤(1)的所得的GOS粗产品用纯水稀释到总糖浓度为40～200g/L，按照10～100g/L的终浓度向体系中加入步骤(2)所得的酵母全细胞沉淀，在温度为20～40℃，和搅拌转速为100～400rpm的条件下进行发酵培养，纯化时间为10～30h，纯化结束后经过离心分离获得GOS上清液和酵母全细胞沉淀，GOS上清液经过蒸馏浓缩获得纯度为80％～99％的GOS终产品。

9.如权利要求7所述的方法，其特征是纯化阶段分离出的酵母全细胞沉淀重复用于步骤(3)。