[发明专利]一种弓形虫wx2基因缺失株、构建方法及用途

说明书

本发明公开了一种弓形虫wx2基因缺失株、构建方法及用途，运用CRISPR/Cas9技术，将弓形虫RH株的wx2基因进行敲除，成功获得具有乙胺嘧啶药物抗性的wx2基因缺失株。具体方法是通过构建CRISPR质粒pSAG1‑Cas9‑U6‑sgwx2和药物抗性片段wx2‑DHFR，利用CRISPR质粒的靶向剪切和药物抗性片段的同源重组，经药物筛选单克隆和单克隆缺失株的鉴定，成功获得弓形虫RH株的wx2基因缺失株。本发明为弓形虫生长的分子机制的研究夯实基础，为弓形虫疫苗的研制和弓形虫药物靶标分子的研究提供了理论基础。

技术领域

本发明涉及一种弓形虫基因缺失株，具体涉及一种弓形虫wx2基因缺失株、构建方法及用途。属于基因工程技术领域。

背景技术

弓形虫(Toxoplasma)在生物界的分类隶属于顶复门、孢子虫纲、真球虫目、肉孢子虫科、弓形虫属。弓形虫寄生广泛，几乎可以感染所有有核细胞。弓形虫需要中间宿主和终末宿主的参与，来完成整个生活史。弓形虫是一种机会致病性原虫，传播途径主要通过粪口、生食或半生食肉类、垂直传播，全球有三分之一以上的人感染该病原体。弓形虫不仅危害人类的身体健康，也不利于动物的繁殖和畜牧业的发展。

弓形虫生活史复杂，宿主十分广泛，危害严重，但目前还没有很好的药物治疗，尤其是针对慢性期包囊的治疗。人感染弓形虫病后，通常使用磺胺嘧啶类治疗，这类药物副作用较大，对胎儿也有致畸作用。此外，目前还没有药物能够杀死包囊中的缓殖子。虽然一种商品化减毒疫苗(Intervet B.V.)已在兽医行业小范围使用，以避免羊的先天性感染。但其可能的副作用和高昂的成本限制了这一商品化疫苗的推广；同时人用弓形虫疫苗的研究仍然没有成功。因此，目前还没有有效的措施来防治弓形虫病。

申请人的前期研究已初步证明WX2为弓形虫功能膜分子，参与机体的细胞免疫应答，并且与弓形虫的毒力相关。但该分子的大部分功能及机制尚不明确。因此，需要进一步深入研究wx2基因的功能，为研发弓形虫药物的作用靶点和弓形虫疫苗提供参考。

发明内容

本发明的目的是为克服上述现有技术的不足，提供一种弓形虫wx2基因缺失株、构建方法及用途。

为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：

1、一种弓形虫wx2基因缺失株，是缺失wx2基因的弓形虫RH株，wx2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示。

wx2基因：