[发明专利]定量检测苍白杆菌的聚合酶链式反应引物、试剂盒和定量检测苍白杆菌的方法

权利要求书

1.定量检测苍白杆菌的聚合酶链式反应引物对，包括上游引物和下游引物，所述上游引物具有如OA3F所示核苷酸序列，所述下游引物具有如OA3R所示核苷酸序列：

OA3F:5'-CAACGGGAACCAGTCGAAGAACGAGCCGCC-3'

OA3R:5'-TCAAGGAAAAGATGCCGGTTTCAATCTCGC-3'。

2.权利要求1所述聚合酶链式反应引物对在检测苍白杆菌中的应用。

3.检测苍白杆菌的PCR试剂盒，包括：NPK02 buffer(2×)、特异性引物对、Taq酶和ddH₂O；所述特异性引物对为权利要求1所述定量检测苍白杆菌的聚合酶链式反应引物对。

4.根据权利要求3所述的PCR试剂盒，其特征在于，所述特异性引物的终浓度为1～3μM。

5.采用权利要求3或4所述PCR试剂盒检测苍白杆菌的反应体系：包括NPK02 buffer(2×)6μL，特异性引物各1.5μL，DNA模板1μL，Taq酶0.3μL，ddH₂O 3.2μL；所述特异性引物的终浓度为1～3μM，所述DNA模板的浓度为10ng/μL。

6.采用权利要求5所述反应体系检测苍白杆菌的方法：包括以下步骤：

以提取得到的待测样品的宏基因组DNA为模板，将所述反应体系进行PCR扩增，得到PCR扩增产物，所述PCR扩增的反应程序为：94℃3min；94℃30s，60℃30s，72℃1min，37个循环；72℃1.5min；

将所述PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。

7.检测苍白杆菌的QPCR试剂盒，包括2×NPK62 Buffer，特异性引物对和Taq酶，所述特异性引物为权利要求1所述引物对。

8.根据权利要求7所述的QPCR试剂盒，其特征在于，所述特异性引物中的上下游引物各自终浓度为1～3μM。

9.采用权利要求7或8所述QPCR试剂盒检测苍白杆菌的反应体系，包括2×NPK62Buffer 6μL，特异性引物各1.5μL，DNA模板4.25μL，Taq酶0.25μL，所述特异性引物中的上下游引物各自终浓度为1～3μM，所述DNA模板的浓度为10ng/μL。

10.采用权利要求9所述反应体系定量检测苍白杆菌的方法，包括以下步骤：

以提取到的待测样品的宏基因组DNA为模板，将所述反应体系进行QPCR扩增，所述QPCR扩增的反应程序为：95℃4min；95℃30s，60℃40s，72℃40s，42个循环；72℃2min；

根据预定的标准原液的浓度与所述QPCR扩增的结果，得到待测样品中苍白杆菌的含量。