[发明专利]三糖重复单元寡糖链在制备金黄色葡萄球菌疫苗中的应用

说明书

本发明公开了三糖重复单元寡糖链在制备金黄色葡萄球菌疫苗中的应用，属于医药领域。本发基于化学合成手段，经过结构优化，获得三糖重复单元寡糖链；将该寡糖链偶联载体蛋白和固定化于基质表面，可制得糖芯片；偶联蛋白制得糖蛋白缀合物，具有突出的免疫活性，进一步制备得到的单克隆抗体可特异性识别金黄色葡萄球菌；原料廉价易得、制备方法简单易重复，在金黄色葡萄球菌的疫苗开发中具有非常好的应用前景。

技术领域

本发明涉及三糖重复单元寡糖链在制备金黄色葡萄球菌疫苗中的应用，属于医药领域。

背景技术

细菌，病毒和寄生虫等病原体表面的糖类抗原具有高度结构特异性，且在其侵染宿主过程中发挥重要作用，是疫苗开发的重要靶点。基于提取细菌表面多糖的糖缀合蛋白疫苗，如流感嗜血杆菌，脑膜炎奈瑟菌和肺炎链球菌疫苗等每年都保障着数百万人的生命健康(C.Anish et al.,Chem Biol,2014,21:38)。但是，随着对于疫苗质量，效力和安全性要求的不断提高，通过提取法制备相对均一的多糖产品往往需要极为繁琐的纯化步骤。此外，不可避免的杂质和非保护性表位混入将导致副反应和低反应性，已严重限制了多糖类疫苗的开发和生产。而合成法制备结构明确，组成均一的寡糖提供了极有价值的替代技术，尤其是针对无法大规模培养的致病菌疫苗开发(C.Anish et al.,Chem Biol,2014,21:38)。随着b型流感嗜血杆菌合成寡糖蛋白缀合疫苗QuimiHi(CIGB，La Habana)的上市，研究人员对于致病菌合成寡糖类疫苗开发进行了大量研究工作(P.Kaplonek et al.,PNAS,2018,115:13353)。合成寡糖抗原具有一个巨大的优势是结构明确，组成均一的寡糖将有利于抗原表位研究，将极大促进糖类抗原结构优化设计。不仅如此，对于通常含有稀有单糖砌块和稀有修饰基团的致病菌表面糖链，最小抗原表位的明确将有助于降低寡糖合成的工作量，以便生产高性价比疫苗(C.Anish et al.,Chem Biol,2014,21:38)。

由于多数病原体表面糖链为重复性多糖，其重复单元寡糖链便成为抗原发现和免疫原设计的优先选择。而对于由长链重复单元组成的多糖(通常含有六个以上糖单元)和非重复性多糖，通常需要基于链长，末端糖基，连接序列和修饰基团等因素制备相应的寡糖片段库，将便于利用病人抗血清开展寡糖的抗原性分析(C.Anish et al.,Chem Biol,2014,21:38)。对于表现良好抗原性的寡糖，经蛋白缀合开展动物免疫实验可对寡糖的免疫原性进行探究，其标志性效能为刺激免疫系统产生可识别完整病原体的抗体(G.Liao et al.,ACS Cent Sci,2016,2:210；F.Broecker et al.,Nat Commun,2016,7:11224；M.Emmadi etal.,J Am Chem Soc,2017,139:14783)。通过单克隆抗体的制备，可开展寡糖抗原与抗体相互作用的研究，提供糖类抗原的表位信息，将显著提高寡糖类疫苗的开发效率(B.Schumannet al.,Sci Transl Med,2017,9:eaaf5347)。