[发明专利]一种基于微流控芯片的快速免疫检测方法

说明书

本发明公开了一种基于微流控芯片的快速免疫检测方法，包括以下步骤：S1、检测芯片的制作；S2、待测样本的免疫捕获；S3、探针修饰二抗的免疫捕获；S4、免疫捕获结果的检测：实现了快速检测，通过一次性操作即可联合检测多个样本，具有样本量少、多样本、多指标可同时检测、特异性强、灵敏度高等优点；具有良好的样品兼容性，适用包括缓冲溶液、血清、血浆等多种待测介质样品；不需要复杂的仪器设备，也不需要实验人员的经验判断，避免了不同操作人员的主观因素，特别适合如2019新型冠状病毒（NCP）、严重急性呼吸综合征（SARS）病毒等重要呼吸道病毒的现场检测及免疫反应动力学研究。

技术领域

本发明涉及生物医学分析技术领域，更具体地，涉及一种基于微流控芯片的快速免疫检测方法。

背景技术

免疫检测因其特异性捕获的能力，在疾病诊断，特别是即时检验技术（POCT）方面发挥着重要作用。目前，常规医院检验科对疾病特征免疫组分的检测，通常基于酶标板采用标准化的酶联免疫（ELISA）程序；尽管因为其直观的酶催化显色可视化定性能力被广泛采用，这种成熟的免疫检测策略，其流程冗长的缺陷一直无法避免。为了最大程度确保检测结果的保真性，一套完整的间接法ELISA程序必须连续完成用于捕获样品的免疫成分的包被孵育、多余包被位点的封闭孵育、待检样本的结合孵育、探针偶联抗体的结合孵育，共计通常需要2小时以上，后续的催化显色过程还需要15-45分钟不等的时间。从原理上分析，在静态酶标板上的ELISA属于非均相上抗原抗体的特异性结合过程，非均相抗原抗体的免疫反应效率主要受体相中分散速率常数和结合速率常数控制，其中分子扩散导致的抗原抗体相对有效距离变化趋向零的概率是一项重要的影响因素。对于静态酶标板上的ELISA，被捕获成分向捕获成分的垂直方向自由扩散，其分子扩散效率非常低，所以需要牺牲大量的反应时间来满足相对饱和的抗原抗体结合需要。

基于酶标板的常规ELISA不仅检测过程耗时较长，而且使用的试剂和样品量也较大，不能满足少量样品或临床及时检测的需求。

发明内容

本发明的主要目的在于克服上述不足之处，提供一种基于微流控芯片的快速免疫检测方法，通过在微流控芯片上调节流体压力，实现非均相抗原-抗体的快速结合；微通道可实现通量自定义，大幅降低试剂消耗量和检测时间，实现多指标免疫检测；通过与所述快速免疫检测方法的联用，更方便地实施可视化定性、可视化半定量或精准定量。

本发明是通过以下技术方案进行实现的：

一种基于微流控芯片的快速免疫检测方法，包括以下步骤：

S1、检测芯片的制作：固相反应基底上预包被免疫反应物、封闭后，与盖片贴合后形成微通道；

S2、待测样本的免疫捕获：向所述微通道的加样腔加入待测样本，37 ℃下使待测样本持续往复运动，混合孵育，用清洗液进行清洗；

S3、探针修饰二抗的免疫捕获：向所述微通道的加样腔加入探针修饰二抗溶液，37 ℃下使探针修饰二抗溶液持续往复运动，混合孵育，用清洗液进行清洗；

S4、免疫捕获结果的检测：对免疫捕获结果进行检测。

优选的，所述检测芯片的形状为圆形或多边形，所述微通道的厚度、直径和数量可根据需要进行设计。

优选的，所述清洗液采用PBST；优选的，微通道通过表面修饰如采用聚乙烯醇，可以降低微通道非特异性吸附造成的干扰背景。

优选的，步骤S2中，采用自动化气压调节模块使待测样本持续往复运动。

优选的，步骤S3中，采用自动化气压调节模块使探针修饰二抗溶液持续往复运动。

作为本发明的技术方案的进一步描述，步骤S1中，所述固相反应基底为玻璃或塑料。

作为本发明的技术方案的进一步描述，步骤S2中，所述待测样本包括缓冲溶液、血清或血浆。