[发明专利]一种重组间充质干细胞及其制备方法和在制备治疗急性肝衰竭药物的应用

说明书

本发明公开了一种重组间充质干细胞及其制备方法和在制备治疗急性肝衰竭药物的应用，重组间充质干细胞利用重组慢病毒感染间充质干细胞获得；其中，重组慢病毒由过表达PTGS2的重组质粒和慢病毒包装载体转染细胞后获得；过表达PTGS2的重组质粒由扩增PTGS2前引物序列和后引物序列、以及空质粒载体Ubi‑MCS‑3FLAG‑CBh‑gcGFP‑IRES‑puromycin制得。本发明可以提高MSCs对急性肝衰竭的治疗疗效。

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种制备治疗急性肝衰竭药物的应用，尤其涉及一种重组间充质干细胞及其制备方法和在制备治疗急性肝衰竭药物的应用。

背景技术

急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)是一种以肝细胞迅速大量坏死和急剧下降的肝功能为特征的临床重症。目前肝移植是治疗ALF最为有效的手段，但由于供肝来源较少等原因限制了其应用。干细胞移植已被认为是治疗多种肝脏疾病的有效方式，间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)正是其中的一种，已经被证明可以缓解多种急性或慢性肝脏疾病。但是临床试验结果显示治疗效果并不尽如人意，无法达到预期效果。因此，探究MSCs治疗肝脏疾病的具体机制，有利于对MSCs进行合理优化，提高MSCs治疗效果，促进临床转化。

ALF主要病理改变是多种原因(药物、病毒等)诱导肝细胞坏死，固有免疫系统激活释放大量炎性介质，进一步诱导肝细胞死亡，加重肝脏损伤。肝脏自身在损伤情况下，部分肝细胞会重新具备再生能力。当其再生能力超过肝脏坏死时，肝脏是具有功能的。但是ALF中大量的肝细胞死亡超出了肝脏本身的代偿能力，仍表现为肝功能的急剧丧失。因此，如何减轻肝脏损伤，提高肝细胞的增殖能力是缓解ALF的重要研究方向。

前期研究表明MSCs主要通过旁分泌作用，分泌大量细胞因子和生长因子，如肿瘤坏死因子诱导蛋白(tumor necrosis factor-inducible gene 6，TSG-6)、前列腺素E2(Prostaglandin E2，PGE2)和转录生长因子(transforming growth factor-β，TGF-β)等，发挥抗凋亡、抗炎、促增殖和调节免疫等作用，从而发挥治疗作用。其中PGE₂是一种广泛存在的生物脂质，主要是由环加氧酶(cyclooxygenase 2，COX2/PTGS2)催化分解花生四烯酸而来，在细胞的增殖、凋亡和调节免疫中均扮演重要角色。在肺部炎症和脑损伤等模型中发现MSCs可以通过分泌PGE2发挥治疗作用。因此，PGE₂修饰的MSCs是否具有更强的减轻肝脏损伤、促进肝脏再生的功能是十分有意义的研究。

目前应用MSCs移植治疗ALF是一项有希望的治疗途径，但还存在一下缺陷：1、ALF主要病理改变是大量的肝细胞死亡超出了肝脏本身的代偿能力，多种因素(药物、病毒等)诱导肝细胞大量的坏死，释放大量的损伤相关分子模式(damage-associated molecularpatterns，DAMPs)，被肝脏内固有免疫系统识别，如单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞等，继而产生大量炎性因子，进一步引起肝脏损伤和肝功能丧失，因此，为了保证临床上能及时有效治疗ALF，异体来源的MSCs是更佳的选择；2、目前为止国内外的许多研究也发现干细胞移植疗效不佳的现象。对这一系列文献的回顾性研究发现主要有两个原因制约了MSC移植治疗的疗效，一是由于移植的MSC在肝脏的定植效率较低，二是由于肝功能衰竭体内存在过激的炎症反应，对移植的MSC具有一定的损伤作用。

发明内容

本发明提供一种，以克服现有技术的缺陷。

为实现上述目的，本发明提供一种重组间充质干细胞，利用重组慢病毒感染间充质干细胞获得；其中，重组慢病毒由过表达PTGS2的重组质粒和慢病毒包装载体转染细胞后获得；过表达PTGS2的重组质粒由扩增PTGS2前引物序列和后引物序列、以及空质粒载体Ubi-MCS-3FLAG-CBh-gcGFP-IRES-puromycin制得。