[发明专利]一种NK免疫细胞体外扩增的方法

权利要求书

1.一种NK免疫细胞体外扩增的方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一、肝素抗凝常规采血，在采血管内添加有肝素，并进行抽血采集；

步骤二、分离外周血淋巴细胞血，从采集到的血液中通过离心分离出外周血淋巴细胞；

步骤三、制备NK免疫细胞培养基，将所需基础培养基和添加物按照一定剂量进行混合；

步骤四、分离原始NK免疫细胞，由外周血淋巴细胞分离得到原始NK免疫细胞；

步骤五、原始NK免疫细胞培养，将获得的原始NK免疫细胞放入培养基中进行培养；

步骤六、诱导原始NK免疫细胞，对培养后的原始NK免疫细胞进行刺激和诱导，以得到活性高的NK免疫细胞；

步骤七、NK免疫细胞扩增，将所获得的NK免疫细胞放置在培养袋内，对NK免疫细胞进行扩增培养。

2.根据权利要求1所述的一种NK免疫细胞体外扩增的方法，其特征在于：所述步骤三中，NK免疫细胞培养基由含有胰岛素样生长因子-Ⅰ的基础培养基和8-12g/L人血清白蛋白、2.5-7.5mmol/L尼克酰胺和0.5-2.0μmol/L来那度胺等组成。

3.根据权利要求1所述的一种NK免疫细胞体外扩增的方法，其特征在于：所述步骤五中，培养原始NK免疫细胞置于37℃、5%CO2的培养箱中培养，间隔预定时间补加NK细胞培养基和其他所需添加物。

4.根据权利要求1所述的一种NK免疫细胞体外扩增的方法，其特征在于：所述步骤六中，对培养后的原始NK免疫细胞采用促细胞生长剂3CS-NK-B1和3CS-NK-B2进行诱导生长。

5.根据权利要求1所述的一种NK免疫细胞体外扩增的方法，其特征在于：所述步骤六中，对原始NK免疫细胞进行刺激并加入诱导剂使细胞密度扩増至初始培养浓度的10倍，停止诱导，其中诱导剂为PMA+ionomycin。

6.根据权利要求1所述的一种NK免疫细胞体外扩增的方法，其特征在于：所述步骤七中，在进行NK免疫细胞扩增时，装盛NK免疫细胞的培养袋为透气细胞培养袋。