[发明专利]一组血栓前状态引起流产早期诊断用标志物及其应用

说明书

本发明公开了一组血栓前状态引起流产诊断用标志物及其应用，所述标志物由如下蛋白组成：Prolactin、MMP‑3、Testican 2、hCGb、IGF‑1R、SLAM、Furin、IL‑17C、APRIL、B2M、Syndecan‑1、JAM‑B、Gas 1、VEGF R1、Desmoglein 2、CEA、BLC、G‑CSF R、ANG‑2、Syndecan‑3、MIF、MCP‑4、Follistatin‑like 1、MCP‑3、NRG1‑b1、EGF、CA15‑3、VEGF R3、IL‑17、BMP‑4、S100A8、GROa、ADAM8。本发明通过实验证实了所述蛋白在血栓前状态引起流产患者和正常人中呈现显著的差异表达，提示可将所述蛋白用作血栓前状态引起流产的诊断标志物用于血栓前状态引起流产的诊断。

技术领域

本发明涉及生物检测领技术领域，具体涉及一组血栓前状态引起流产早期诊断用标志物及其应用。

背景技术

人类大约有35000个基因，但人体的蛋白质却多达100000多种，一个基因并非只表达一种蛋白质。要研究生命现象，阐述生命活动的规律，只了解基因组的结构是远远不够的，必须对于生命活动的直接执行者-蛋白质的重要性有更深刻的理解，因此，作为功能基因组学的重要内容之一的蛋白质组学(Proteomics)应运而生。“蛋白质组”这一概念由澳大利亚的Wilkins和WilliamS于1994年提出，其定义为一个细胞或一个组织的基因组所表达的全部相应的蛋白质，它是对应于一个基因组的所有蛋白质构成的整体，而不是局限于一个或几个蛋白质，是揭示蛋白质功能与细胞生命活动规律一个新的研究领域。蛋白芯片法是近年伴随基因芯片发展起来的一项新技术。其基本原理是将各种蛋白质有序地固定于载玻片等介质载体上成为检测的芯片，然后，用标记了有特定荧光物质的抗体与芯片作用，与芯片上的蛋白质相匹配的抗体将与其对应的蛋白质结合，抗体上的荧光将指示对应的蛋白质及其表达数量。在将未与芯片上的蛋白质互补结合的抗体洗去之后利用荧光扫描仪或激光共聚扫描技术，测定芯片上各点的荧光强度，通过荧光强度分析蛋白质与蛋白之间相互作用的关系，由此达到测定各种基因表达功能的目的。该技术在对抗原抗体检测、疾病诊断、药物开发等研究方面显示出快速、高效、高通量处理信息的能力。而传统的ELISA方法是建立在单向反应或单一指标的基础上，如果想获得大量的疾病信息，需要采集较多的标本，并且分别进行多次实验。若想进一步分出亚型，则需做更多次单个的实验。将检测结果与传统的ELISA法相比较，实验表明蛋白芯片检测结果与ELISA法有很好的一致性，且蛋白芯片具有高通量的特点，可一次性定量检测多种蛋白，较ELISA法更为简洁、方便、快捷，值得临床推广。

目前，蛋白质芯片技术广泛地应用于前列腺癌、卵巢癌、膀胱癌、胰腺癌、乳腺癌、肝癌等十余种恶性肿瘤的特异蛋白质图谱分析，发现有意义的蛋白标志物，用于恶性肿瘤的早期诊断；在妊娠相关疾病的发生和预后的早期预测同样有广阔的探索空间。stellacL等应用蛋白芯片技术测定25例正常妊娠妇女及20例临床表现为早产妇女的血清，结果发现质荷比为7783的蛋白质峰上调，质荷比为3164的蛋白质峰下调，初步推断早产与正常妊娠差异表达的血清蛋白质，可能是导致早产始动因素，该两个蛋白质峰的发现，可能有助于早产的早期预测，从而为预防早产提供最佳时机。BuSChA等运用SELDI-TOF和基因芯片技术测定24例10周到14周的21三体综合征母体血清和24例正常妊娠的差异蛋白质，初步得到1组特征性蛋白质组，认为可用于早期预测21三体综合征，为发展非侵入性产前诊断提供可能。

发明人在前期对复发性流产血栓前状态与肾虚血瘀症的相关性研究中，通过蛋白质芯片技术筛选到两个特异性的蛋白IGFBP-rPl和VEGF，其中IGFBP-rPl作为分泌蛋白可能通过抑制EMT过程，而影响到胚胎生长发育，导致流产的发生；VEGF可能通过其受体KDR蛋白的分布从而导致血管收缩，促进血小板聚集，形成血栓前状态，最终导致流产的发生。发明人在前期研究的基础上，通过筛选血栓前状态引起的流产病人，非血栓前状态引起的流产病人以及正常人的血清，进一步探讨血栓前状态后导致的流产的特异性标志物和导致流产的机制，以期对血栓前状态引起的流产能够早期预测。

发明内容