[发明专利]小麦抗白粉病基因Pm21的高通量SNP诊断标记及其在育种中的应用

权利要求书

1.一种小麦抗白粉病基因Pm21的高通量SNP诊断标记，其特征在于：所述标记位于普通小麦6A染色体短臂上，对小麦白粉病表现为全生育期抗性，该分子标记为单核苷酸多态性位点，SNP位点处为G/C突变；

所述标记为高通量SNP标记，包括2条正向引物，1条反向引物；引物序列如下：

与抗病位点结合的正向引物KASP-QPm21_6A-F-FAM，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示：

5＇-ACAATATCTGACGGGATGCTTG- 3＇；

与感病位点结合的上游序列KASP-QPm21_6A-F-HEX，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示：

5＇-ACAATATCTGACGGGATGCTTC- 3＇；

反向引物KASP-QPm21_6A-R，其核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示：

5＇-CRRGCTTGTTCATTTGGAGAC- 3＇。

2.根据权利要求1所述的一种小麦抗白粉病基因Pm21的高通量SNP诊断标记的应用，其特征在于，使用所述标记鉴定或检测Pm21是否存在，步骤如下：

（1）以小麦DNA为PCR扩增模板，以KASP-QPm21_6A为引物，进行PCR扩增，反应体系为6μL，上述反应体系具体包括：20-50ng/μL的DNA 3μL，2×KASP Master mix 3μL,KASP Assaymix(上下游引物混合液)0.0825μL，置于384孔PCR仪扩增；

（2）PCR扩增程序为:94℃预变性15min；94℃变性20s，65-57℃复性60s（每循环降低0.8℃），10个循环；94℃变性20s，57℃复性60s，30个循环；10℃保存；

（3）PCR结束后，置于Omega SNP分型仪检测PCR分型结果；

（4）分析鉴定，分型结果若为“X:X”则含有Pm21抗病基因，分型若为“Y:Y”，则不含该抗病基因。

3.根据权利要求2所述的一种小麦抗白粉病基因Pm21的高通量SNP诊断标记的应用，其特征在于：所述标记在标记辅助育种中的应用。

4.根据权利要求2所述的一种小麦抗白粉病基因Pm21的高通量SNP诊断标记的应用，其特征在于：所述标记在筛选小麦抗白粉病基因Pm21中的应用。