[发明专利]一种卷叶黄精组织培养方法

说明书

本发明公开了一种卷叶黄精组织培养方法，包括以下步骤：将卷叶黄精块茎在流水中洗净，然后在洗衣粉溶液中浸泡，流水洗净后次氯酸钠溶液浸泡，无菌水冲洗，晾干，得预处理后卷叶黄精块茎；用乙醇表面灭菌，冲洗，再放入氯化汞溶液灭菌，冲洗，吸干水分，得灭菌后卷叶黄精块茎；切成小块，再接入分化培养基中，培养得分化后黄精不定芽；接入增殖培养基中，培养得黄精不定芽丛；切成芽块，接入生根培养基中，培养得黄精苗；半遮光放置，消毒后定植，培养得黄精种苗，然后移植于室外土壤。本发明以卷叶黄精块茎为外植体，经组织培养快速获取黄精种苗，实现黄精的快速繁殖，有效解决了黄精存活率低、繁殖所需时间长种苗生长慢和质量不稳定的问题。

技术领域

本发明涉及卷叶黄精组织培养技术领域，具体涉及一种卷叶黄精组织培养方法。

背景技术

黄精为我国常用的中药材，是百合科黄精属多年生草本植物根茎的总称。黄精化学成份主要有糖类、黄酮及蒽醌类化合物、甾体皂苷、生物碱、强心苷、木脂素、维生素和多种对人体有用的氨基酸及微量元素等；药理研究认为，黄精具有延长寿命、抗衰老、影响心血管系统、提高免疫能力、抗炎、抗病原微生物、抗疲劳、提高学习记忆力、抑制肿瘤细胞等作用，且安全无毒、无致突变性。临床应用研究报道，黄精及其制剂对呼吸系统、心血管系统、消化系统以及白细胞减少症、糖尿病、结核病、老年痴呆、外生殖器感染、足癣甲癣、蛲虫病、慢性肝炎、秃发、习惯性流产和不育症、慢性荨麻疹、痛风性关节炎、瘰疠等疾病均有明显疗效。另外，黄精还可用于制饮料、做蜜饯、加工保健品和护肤品、充当猪饲料添加剂以及作蔬菜和观赏花卉等。可见其用途非常广泛。

随着黄精药用价值和保健价值越来越被人们认识，黄精原料的需求量也越来越大，致使野生黄精的无计划采集加剧，导致其资源枯竭加速，影响可持续开发利用。因此，为了保证黄精原料来源、实行产业化种植将成为必然趋势。近年来虽然有些地方开始人工种植黄精，但人工栽培技术还处于野生变家种阶段，运用块茎或种子培育黄精种苗，存活率低，质量不稳定，繁殖所需要的时间长，繁殖种苗生长慢，难以达到快速大量繁殖、大批量生产的要求。

植物的离体快速繁殖，是目前植物组织培养中应用最广泛、最有效的技术，尤其对于新引进品种、灭菌苗、优良单株、濒危植物和基因工程植株等可实现离体快速增殖，且不受地区、气候影响，繁殖速度比常规生产快数百万倍，能迅速提供大量优质种苗。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供了一种卷叶黄精组织培养方法，以卷叶黄精块茎为外植体，经组织培养快速获取黄精种苗，实现黄精的快速繁殖，有效解决了黄精存活率低、繁殖所需时间长种苗生长慢和质量不稳定的问题。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种卷叶黄精组织培养方法，包括以下步骤：

(1)预处理：将当年生卷叶黄精块茎洗净，然后在浓度为2～6vt％的洗衣粉溶液中浸泡5～10min，用流水洗净，再用0.001wt％次氯酸钠溶液浸泡8～12min，继续用流水洗净，最后用无菌水冲洗10～15min，晾干，得预处理后的卷叶黄精块茎；

(2)灭菌：将步骤(1)所得预处理后的卷叶黄精块茎，先用75vt％乙醇表面浸泡15～30s，无菌水冲洗3～5次，再放入0.05～0.2vt％的氯化汞溶液中，并滴加3～6滴0.1～0.2vt％的聚山梨酯-80溶液，灭菌10～30min，继续用无菌水冲洗3～5次，最后用无菌滤纸吸干水分，得灭菌后的卷叶黄精块茎；

(3)诱导分化：将步骤(2)所得灭菌后的卷叶黄精块茎切成小块，再接入分化培养基中，在1800～2300lx光照和23～26℃温度下培养20～30d，得分化后黄精不定芽；分化培养基在MS培养基的基础上还包括1.5～2mg/L甲钴胺、3～4mg/L 6-苯甲基腺嘌呤、0.1～0.4mg/L萘乙酸、25～30g/L蔗糖和6～9g/L琼脂；