[发明专利]通用埃博拉病毒病免疫球蛋白及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种免疫原性组合物，其特征在于，其包含由SEQ ID NO:1所示的聚核苷酸编码的蛋白质以及由SEQ ID NO:2所示的聚核苷酸编码的蛋白质。

2.埃博拉病毒蛋白质亚单位疫苗，其特征在于，其是利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统制备包含SEQ ID NO:1和2所示聚核苷酸的重组杆状病毒，将收获的重组杆状病毒接种昆虫细胞，培养转染的细胞，收集细胞培养上清，纯化后与佐剂混合得到的。

3.根据权利要求2所述的亚单位疫苗，其特征在于，昆虫细胞-杆状病毒表达系统所使用的表达载体为pFastBacDual、pFastBac1、pFastBacHT A、pFastBacHT B或pFastBacHT C；

昆虫细胞为Sf21、Sf9或Mimic Sf9；

佐剂为206佐剂、弗氏完全或不完全佐剂。

4.根据权利要求3所述的亚单位疫苗，其特征在于，昆虫细胞-杆状病毒表达系统所使用的表达载体为pFastBacDual；

昆虫细胞为Sf9；

佐剂为206佐剂。

5.埃博拉病毒蛋白质亚单位疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将埃博拉病毒基因GP和VP40克隆于同一昆虫杆状病毒表达载体pFastBacDual上，转化大肠杆菌DH10 Bac感受态细胞，提取阳性质粒即为重组杆状病毒Bacmid质粒，用重组杆状病毒Bacmid质粒转染昆虫细胞Sf9，拯救获得重组杆状病毒，将获得的重组杆状病毒接种昆虫细胞Sf9，27-30℃静止培养48-72h后，或27-30℃50-100rpm摇床振荡培养24-48h后收获细胞上清液，即得到埃博拉病毒样颗粒抗原原液；

(2)上述原液使用300kDa纤维柱浓缩后，采用蔗糖密度梯度离心，在蔗糖密度30％和60％之间得到纯化的病毒样颗粒；

(3)将上述纯化的病毒样颗粒与206佐剂按1：1体积比混合均匀；

其中，基因GP的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；基因VP40的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

6.表达埃博拉病毒GP和VP40蛋白的重组痘苗病毒，其特征在于，其是将包含SEQ IDNO:1和2所示聚核苷酸的转移质粒载体与痘苗病毒载体共转染真核细胞，培养转染的细胞，收集细胞培养上清，纯化后得到的。

7.根据权利要求6所述的重组痘苗病毒，其特征在于，所述痘苗病毒载体为痘苗病毒安哥拉株或痘苗病毒天坛株；

转移质粒载体为pVAX1或pBluescipt；

真核细胞为Vero、MRC-5或MDCK。

8.根据权利要求7所述的重组痘苗病毒，其特征在于，所述痘苗病毒载体为痘苗病毒天坛株；

转移质粒载体为pBluescipt；

真核细胞为Vero。