[发明专利]辛酰化Ghrelin在体外抑制卵丘细胞复合体cAMP和MAPK分泌中的应用有效
申请号: | 202010121199.9 | 申请日: | 2016-08-01 |
公开(公告)号: | CN111286485B | 公开(公告)日: | 2022-01-28 |
发明(设计)人: | 白佳桦;刘彦;许晓玲;冯涛;宋玉清;肖霖力 | 申请(专利权)人: | 北京市农林科学院 |
主分类号: | C12N5/075 | 分类号: | C12N5/075 |
代理公司: | 北京智为时代知识产权代理事务所(普通合伙) 11498 | 代理人: | 王加岭;杨静 |
地址: | 100097 *** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 辛酰化 ghrelin 体外 抑制 细胞 复合体 camp mapk 分泌 中的 应用 | ||
本发明提供了辛酰化Ghrelin在体外抑制牛卵母细胞卵丘细胞复合体cAMP和MAPK分泌中的应用,进而可体外抑制牛卵母细胞减数分裂。通过辛酰化Ghrelin体外培养抑制牛卵母细胞减数分裂的恢复,从而使得卵母细胞核和细胞质同步成熟,进而提高了牛卵母细胞的质量以及体外发育能力。能够成为新型的减数分裂制剂药物在畜牧业生产上推广应用,具有良好的市场效应和社会效应。
本案为分案申请,其母案申请日为2016年8月1日,申请号为2016106215951,发明名称为“辛酰化Ghrelin在促进牛卵母细胞体外成熟中的应用”。
技术领域
本发明涉及家畜配子胚胎工程技术领域,具体涉及辛酰化Ghrelin在促进牛卵母细胞体外成熟中的应用。
背景技术
牛卵母细胞体外成熟(In Vitro Maturation,IVM)作为胚胎体外生产技术(InVitro Production,IVP)的三大技术环节之一,是一项重要的繁殖生物技术,也是决定体外胚胎生产的关键技术。其通过体外成熟培养屠宰场废弃卵巢有腔卵泡来源卵母细胞获得大量可用卵子,可以为育种、克隆、性别控制、细胞核移植、转基因动物生产等提供丰富的成熟卵源,变废为宝。
卵母细胞体外成熟是指卵母细胞离开卵泡环境后,在体外一定培养条件下能够自发恢复减数分裂进程,并获得能够正常受精以及进一步发育的能力。卵母细胞的体外成熟是一个复杂的生理过程,主要包括细胞核成熟和细胞质成熟。但在体外成熟过程中,虽然能够使卵母细胞在体外环境下完成减数分裂,但是由于离开了卵泡液,细胞质在未发育好的情况下细胞核恢复减数分裂,导致细胞核、细胞质成熟不同步,这样就会造成卵母细胞质量以及受精后胚胎发育能力较差,因此限制了此项技术的利用效率,细胞核、细胞质同步成熟成为亟待解决的问题。
鉴于以上原因,许多学者开发了卵母细胞体外两段成熟培养方法,即通过体外使用减数分裂抑制剂暂时可逆的阻止卵母细胞减数分裂恢复,同时促进胞质发育,然后移出减数分裂抑制环境,进行体外成熟。其中发明专利CN 102899286 A公开了卵母细胞体外成熟的培养液以及分段培养方法。
Ghrelin(Ghre在印欧语系作词根,意为“grow”)。目前,我国学术界对Ghrelin尚没有统一的译名,所以有生长激素促释放剂、生长激素促分泌素、生长激素释放肽、生长素和脑肠肽等多种称谓。Ghrelin含28个氨基酸残基组成,其中经测定,发现在血液和组织中Ghrelin以两种主要形式存在:N端辛酰化和脱酰化修饰的Ghrelin。
Ghrelin的功能除了具有调节生长素的分泌、胃肠生理活动、能量代谢、心血管活动等功能外,还具有调节生殖的作用。越来越多的研究表明,Ghrelin在生殖轴的不同层次影响着动物的生殖。其中,对激素的分泌有着十分重要的调节作用。同时,Ghrelin还具有调节动物的发情,胚胎的发育等功能。
但是,辛酰化Ghrelin在牛卵母细胞体外分段成熟培养以及进一步用于体外受精、胚胎生产的作用尚不确定,目前尚无此方面的研究报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种牛卵母细胞体外成熟前培养液。
本发明另一目的是提供一种促进牛卵母细胞体外成熟的培养液及方法。
本发明再一目的是提供辛酰化Ghrelin在促进牛卵母细胞成熟中的应用及辛酰化Ghrelin在制备用于促进牛卵母细胞体外成熟药物/减数分裂抑制剂药物中的应用。
所述牛卵母细胞体外前成熟培养液以牛卵母细胞体外培养液为基质,在所述基质中含有辛酰化Ghrelin。
优选地,所述辛酰化Ghrelin浓度为10-50ng/mL,更优选,所述辛酰化Ghrelin浓度为50ng/mL。
优选地,所述基质为不含hepes的TCM199培养液。
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