[发明专利]一种糖基联合细胞穿透肽修饰的脑靶向纳米脂质体的制备方法与应用

说明书

本发明涉及一种糖基联合细胞穿透肽修饰的脑靶向纳米脂质体及其制备方法与应用，属于靶向给药技术领域。为解决糖基修饰的脂质体穿透细胞膜能力弱而使药物聚积在细胞外，难以发挥药效的问题，本发明提供了一种糖基联合细胞穿透肽修饰的脑靶向纳米脂质体，该脂质体包含一定摩尔比的EPC、CHO、糖基修饰聚乙二醇化磷脂和细胞穿透肽修饰聚乙二醇化磷脂。通过在纳米脂质体表面同时修饰糖基和细胞穿透肽，使其兼具主动靶向于脑部和穿透细胞膜的能力。将其用于药物载体，可使所携带的药物高效的特异性靶向脑组织并进入脑细胞发挥作用。经体外细胞试验和体内分布实验均证明本发明提供的脑靶向纳米脂质体可以顺利到达脑部并蓄积在脑细胞中发挥药效。

技术领域

本发明属于靶向给药技术领域，尤其涉及一种糖基联合细胞穿透肽修饰的脑靶向纳米脂质体及其制备方法与应用。

背景技术

脑部肿瘤、帕金森氏症、老年痴呆、抑郁症以及精神分裂症等中枢神经系统疾病危害严重，治疗难度大。随着分子生物学技术的发展，人们对疾病的认识也转进深入到蛋白、基因和分子层面。这些理论和技术的发展，使得大分子，多肽、蛋白质、抗体、多聚糖与核酸药物应运而生，用于治疗因基因结构或表达异常引起的脑部疾病的预防和诊断。然而由于每个生物大分子内有几千到几十万个原子，分子量从几万到几百万以上，使得100％的生物大分子药物难以通过血脑屏障(Blood-Brain Barriers，BBB)进入中枢神经系统和细胞内发挥作用。此外，由于血脑屏障的特殊结构，有接近98％的小分子物质也不能够进入脑组织。因此，寻找能够高效穿透血脑屏障和神经细胞膜的药物载体对实现药物的脑靶向性，提高药物疗效，降低外周副作用具有重要意义。

脂质体是磷脂分散在水中形成的类球状、包封一部分水相的封闭囊泡，其粒经大小可在15纳米到几十微米，可作为疏水、亲水以及两亲性药物载体。脂质体在体内无降解、无毒、无免疫原性，做为药物载体可以提高治疗指数、降低毒副作用、减少给药剂量，可作为提高药物脑内浓度的理想载体。但是普通脂质体进入体内可以快速被肝、脾和骨髓等组织的网状内皮系统吞噬而不能到达靶位。在脂质体表面修饰聚乙二醇链，可以形成空间稳定的脂质体，避免被吞噬细胞吞噬，延长其在血液中停留时间，增加了循环至血脑屏障的机会。如果脂质体纳米粒经过特异的表面修饰，可以实现主动靶向于脑部的目的，并改变药物对生物膜的透过性，有利于药物向细胞内的传递。

表达在血脑屏障上的葡萄糖转运蛋白-1可以转运葡萄糖，果糖，半乳糖，甘露糖和其他具有相似结构的物质进入血脑屏障。利用血脑屏障的葡萄糖转运体作为靶点来设计糖搭载脂质体制剂，可实现脑靶向给药的目的。用于脑缺血、脑肿瘤治疗的糖基修饰的脂质体就是其中之一。糖基修饰的脂质体表现出较好的脑靶向性，但其细胞膜穿透性较弱，有些药物如核酸类药物以及部分肽类药物需要进入细胞核发挥作用，而单一糖基修饰的脂质体虽然能够穿透血脑屏障进入脑组织，但其穿透细胞膜进入细胞的作用较弱，使得药物蓄积在细胞外，造成其药效下降。

发明内容

为解决单一糖基修饰的脂质体穿透细胞膜进入细胞能力弱而使药物聚积在细胞外，药效下降的问题，本发明提供了一种糖基联合细胞穿透肽修饰的脑靶向纳米脂质体及其制备方法与应用。

本发明的技术方案：

一种糖基联合细胞穿透肽修饰的脑靶向纳米脂质体，包含摩尔比为(50～70):(20～40):(5～9):(1～5)的EPC、CHO、糖基修饰聚乙二醇化磷脂和细胞穿透肽修饰聚乙二醇化磷脂。

进一步的，所述糖基修饰聚乙二醇化磷脂中的糖基为甘露糖、半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖、麦芽二糖或麦芽三糖中的一种，所述糖基修饰聚乙二醇化磷脂中聚乙二醇的分子量为600～5000Da。

进一步的，所述糖基修饰聚乙二醇化磷脂为甘露糖修饰聚乙二醇化磷脂DSPE-PEG2000-MAN。

进一步的，所述细胞穿透肽修饰聚乙二醇化磷脂中的细胞穿透肽为TAT肽、MAP肽、KALA肽、PPTG肽或PEP-1肽中的一种，所述细胞穿透肽修饰聚乙二醇化磷脂中聚乙二醇的分子量为600～5000Da。