[发明专利]一种人AD7c-NTP单克隆抗体及其制备方法和应用在审

专利信息
申请号: 202010121705.4 申请日: 2020-02-26
公开(公告)号: CN111440237A 公开(公告)日: 2020-07-24
发明(设计)人: 赵风强;董兵;杨春;吴妤;邬晓东 申请(专利权)人: 北京博奥森生物技术有限公司;天津森郁生物科技有限公司
主分类号: C07K16/18 分类号: C07K16/18;C07K1/22;G01N33/68;G01N33/577
代理公司: 北京盛凡智荣知识产权代理有限公司 11616 代理人: 王勇
地址: 100000 北京市通州区中关村科技园区*** 国省代码: 北京;11
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摘要:
搜索关键词: 一种 ad7c ntp 单克隆抗体 及其 制备 方法 应用
【说明书】:

发明公开了一种人AD7c‑NTP单克隆抗体及其制备方法和应用,通过以下步骤制备:以AD7c‑NTP重组蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,再进行小鼠脾细胞和鼠骨髓瘤细胞融合及亚克隆,筛选特异性、效价高的单克隆抗体,最后腹水制备及纯化,获得抗人AD7c‑NTP蛋白的单克隆抗体。本发明与现有的技术相比的优点在于:本发明提供了可产生抗人AD7c‑NTP单克隆抗体的杂交瘤细胞株I1B10和杂交瘤细胞株X1C11,以及抗人AD7c‑NTP单克隆抗体I1B10和X1C11,该抗体对可通过双抗体夹心法对人体液中AD7c‑NTP浓度进行检测,具有重要的应用前景。

技术领域

本发明涉及单克隆抗体制备领域,具体是一种人AD7c-NTP单克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种神经退行性疾病,以智力功能受损和失忆的慢性 恶化过程为特征。2001年,全世界有1100万人患有阿尔茨海默病(Gadit,2001)。到2005年,全世界有 2420万人患有老年痴呆[Reitz C,2011];2010年,这一数字增至3600万,到2030年将增至6600万, 到2050年将增至1.15~1.35亿[The Global Impactof Dementia 2013–2050]。目前,阿尔茨海默病成 为第六主要死因(AA,2012)。阿尔茨海默病在所有痴呆症患者中约占70%。最新的诊断指南将阿尔茨海默 病分为三个阶段:痴呆阶段;有症状,痴呆前期(又称轻度认知障碍)和无症状,临床前阶段[Jack CR, 2011]。目前仍没有有效的治疗方法来预防、制止或逆转阿尔茨海默病;AD的唯一有效的治疗方法是延缓或减轻症状[Huang Y,2012]。因此,AD的早期诊断至关重要。

神经元丝状蛋白(Neuronal thread protein,NTP)是一类跨膜磷酸化蛋白,可诱导神经元凋亡和线粒 体功能障碍[De la Monte SM,2001];NTP在神经元细胞增殖、分化、脑发育和AD神经元退变过程中表达 增加[De la Monte SM,1997]。

AD7c-NTP是NTP家族中的一个成员,是由Suzanne M.de la Monte等首次从AD晚期患者的颞叶中分 离出一个新的包含Alu序列cDNA,被命名为AD7c-NTP,其序列全长为1442bp,含有1125个核苷酸组成的 ORF,可编码含375个氨基酸的成熟蛋白,分子质量约为41kD,等电点为9.89[Monet SM,et al.1997]。 2004,桂俊豪等利用生物信息学方法发现AD7c-NTP基因定位于lp36.11的负链上,无内含子序列,编码 产物可能存在3个跨膜区。

Ghanbari H等采用免疫学方法对AD疑似患者脑脊液(CSF)或尿液中的AD7c-NTP蛋白含量进行检测 有助于AD的早期诊断和鉴别诊断。De la Monte SM等研究发现AD7c-NTP基因的异常表达与AD型痴呆的 典型细胞表型密切相关。AD7c-NTP可能是一种新的、具有重要临床应用价值的AD早期诊断的生物标记物 [De la Monte SM,2002Neugroschl J,2002]。因此,开发用于临床诊断的AD7c-NTP抗原检测试剂盒 具有重要的意义。

2007年,盛树立等通过设计、合成AD7c-NTP抗原决定簇多肽片段,制备多克隆抗体,用于开发AD7c-NTP 体外诊断试剂盒;杨永芳(2015)等同样通过设计、合成AD7c-NTP抗原表位多肽,制备鼠单克隆抗体, 并用于开发AD7c-NTP体外诊断试剂盒。然而,市面上AD7c-NTP体外诊断试剂盒在临床应用时反馈率较高, 且与临床症状符合率不高,且临床操作不便、反应时间较长。因而,急需开发特异性更好、与临床符合率 更高、操作方便、快捷的AD7c-NTP体外诊断试剂盒。

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