[发明专利]一种生物酶制作方法

权利要求书

1.一种生物酶制作方法，其特征在于：具体包括以下步骤：

S1、原料培养：取用新鲜麸皮8.5g，米糠3.5g、豆饼粉2.0g、(NH4)2S040.5g、K2HP040.08g、CaC120.05g和水9.5mL放置在500mL容量的烧杯中进行混合，利用磁力搅拌器对烧杯中的混合溶剂进行混合搅拌，接着使用pH为5.0的标准缓冲液对混合溶液的pH值进行校准，在完成混合溶液pH值校准后将pH计的电极用蒸馏水冲洗后浸入到烧杯的培养基中，从pH计的刻度读出培养基的pH值，将复合电极和电阻温度计置于培养基中，从烧杯远离电极的一端缓慢加人适量的盐酸和氢氧化钠，使培养基达到并保持pH值为5.5；

S2、原料发酵：将步骤S1中烧杯内部的培养基置于容量250mL的三角瓶中，对三角瓶采用变温培养，完成原料的发酵；

S3、生物酶提取：取用步骤S2中的发酵液100mL置于烧杯中，向100mL发酵液中加入絮凝剂，在室温下利用搅拌器对发酵液进行搅拌，搅拌速率为2500转/分钟，搅拌时间为10分钟，接着将混合液装入离心管中，将离心管放入离心机中，利用离心机对离心管内部的混合溶液进行离心处理，对完成离心处理后的混合溶液进行脱色处理，使用过滤纸板对发酵液进行一级过滤，接着对发酵液采用离子交换层析和凝胶过滤层析进行二级过滤处理，在完成发酵液的过滤处理后，选用聚丙烯膜对发酵液进行浓缩处理，对经过浓缩处理后的发酵液先通过在烘干箱中进行烘干，最后利用热气流对发酵液进行完全干燥，获得含有生物酶的冻干品。

2.根据权利要求1所述的一种生物酶制作方法，其特征在于：所述步骤S1中，在进行混合溶液的pH值调整时，混合溶液置于25摄氏度的环境中。

3.根据权利要求1所述的一种生物酶制作方法，其特征在于：所述步骤S2中，三角瓶采用的变温培养过程为：30摄氏度堆积培养48小时,接着对三角瓶中的培养基进行翻料，最后将温度调至27摄氏度继续培养至120小时。

4.根据权利要求1所述的一种生物酶制作方法，其特征在于：所述步骤S3中，离心机对混合溶液离心处理的离心条件为：离心温度5摄氏度，离心速率为8500转/分钟，离心时间为5分钟。

5.根据权利要求1所述的一种生物酶制作方法，其特征在于：所述步骤S3中，脱色处理使用质量分数为1％的中颗粒活性炭。

6.根据权利要求1所述的一种生物酶制作方法，其特征在于：所述步骤S3中，过滤纸板由孔径45Hm棉花纤维、石棉和硅藻土组成，纸板过撞机的压力为0.3MPa。

7.根据权利要求1所述的一种生物酶制作方法，其特征在于：所述步骤S3中，离子交换层析使用φ216cmX30cmDEAESepharoseCL6B层析柱，缓冲液体系采用pH8.0的Tris-HC1缓冲液，洗脱液为含NaC1、pH8.0的TrisHC1缓冲液。

8.根据权利要求1所述的一种生物酶制作方法，其特征在于：所述步骤S3中，凝胶过滤层析使用的介质为Hiload16/60Superdex200pg预装柱，缓冲液体系采用pH8.0的Tris-HCl缓冲液。