[发明专利]具有细胞响应迁移效应的功能性丝素蛋白支架及制备方法

权利要求书

1.一种具有细胞响应迁移效应的功能性丝素蛋白支架的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

步骤1.丝素蛋白溶液的制备：将天然蚕丝置于碳酸钠溶液中煮沸进行脱丝胶处理数次，即可获得蚕丝纤维，拉松、置于通风橱晾干、待用；然后将蚕丝纤维用无水氯化钙、无水乙醇和超纯水混合的三元溶液溶解后进行透析处理，透析完放入洁净的通风橱浓缩至适用浓度8%后，离心，滤膜过滤，得到纯化后的丝素蛋白溶液，2-5℃待用；

步骤2.支架的制备：将步骤1所得的丝素蛋白溶液注入特定的外径6mm，内径3mm，长度8cm导管模具当中，放置于-20到-40℃冰箱预冷冻过夜，然后将其模具内芯去除放置于冷冻干燥机中进行冻干，取出后放入无水乙醇中交联，得到丝素蛋白支架晾干待用；

步骤3.纳米颗粒载入：将步骤2所得到的丝素蛋白支架放入2.5 mg/mL氧化铁纳米颗粒溶液中浸泡，直至丝素蛋白支架被溶液均匀浸润，然后将浸润后的丝素蛋白支架放入冷冻干燥机中再次冷冻干燥，得到载有氧化铁纳米颗粒的丝素蛋白支架；

步骤4.膜包覆：先将磷脂膜溶于溶剂中得到磷脂膜溶液2mg/mL，然后将步骤3所得的具有功能组分的丝素蛋白支架放入相变磷脂膜溶液中，然后放入通风橱中干燥，即可得到内外包覆有磷脂膜的丝素蛋白支架；

步骤5.膜再次包覆：将5%PVA溶液涂敷在步骤4所得的内外包覆有磷脂膜的丝素蛋白支架外表面，然后放入烘箱中进行干燥即可得到具有细胞响应迁移效应的功能性丝素蛋白支架。

2.根据权利要求1所述的一种具有细胞响应迁移效应的功能性丝素蛋白支架的制备方法，其特征在于，步骤1所述的碳酸钠溶液浓度为0.5±0.01wt%，所述的脱丝胶处理次数≥3次。

3.根据权利要求1所述的一种具有细胞响应迁移效应的功能性丝素蛋白支架的制备方法，其特征在于，步骤1所述的三元溶液是无水氯化钙、无水乙醇和超纯水的摩尔比为1:2:8，所述的透析分子量为12000-14000Da，所述的浓缩浓度为5-10%（g/mL），所述的离心速率是1200-1500rpm,所述的滤膜是50-100μm。

4.根据权利要求1所述的一种具有细胞响应迁移效应的功能性丝素蛋白支架的制备方法，其特征在于，步骤2所述的模具包括套管、内芯和封盖三部分结构，套管采用的是聚乙烯吸管，直径4-6mm，内芯是直径2-3mm纤维增强塑料棒，封盖采用不锈钢设计，一端密闭一端不密闭，直径大小和套管直径吻合，所述的预冷冻时间为12-24h，所述的无水乙醇交联时间为14-24h。

5.根据权利要求1所述的一种具有细胞响应迁移效应的功能性丝素蛋白支架的制备方法，其特征在于，步骤3所述的氧化铁纳米颗粒溶液的浓度20-80%（g/mL）；所述的氧化铁纳米颗粒是一种聚葡萄糖山梨醇羧甲醚PSC包裹的γ-Fe₂O₃, 粒径为19-31nm，平均分子量为600-750KDa；所述的支架在氧化铁纳米颗粒的浸泡时间为24-48h。

6.根据权利要求1所述的一种具有细胞响应迁移效应的功能性丝素蛋白支架的制备方法，其特征在于，所述的DPPC相变温度为41-43℃；所述的溶剂为氯仿或甲醇/氯仿的混合液。

7.根据权利要求1所述的一种具有细胞响应迁移效应的功能性丝素蛋白支架的制备方法，其特征在于，所述的烘箱温度为37-60℃，加热时间为30-180min；所述的细胞是巨噬细胞、平滑肌细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞中的一种及以上。

8.根据权利要求1所述的一种具有细胞响应迁移效应的功能性丝素蛋白支架的制备方法，其特征在于，所述的滤膜材料选自尼龙、聚四氟乙烯、聚醚砜、混合纤维素酯、聚偏氟乙烯中的一种。

9.一种如权利要求1所述方法制备的具有细胞响应迁移效应的功能性丝素蛋白支架的应用，其特征在于，所述的功能性丝素蛋白支架应用于多种组织的修复。

10.根据权利要求9所述的具有细胞响应迁移效应的功能性丝素蛋白支架的应用，其特征在于，所述的修复是血管损伤修复。