[发明专利]一种病毒核酸的建库方法

权利要求书

1.一种病毒核酸的建库方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：样品处理，临床样品复杂多样,不仅含有大量的宿主基因还混杂有细菌等其他微生物，有必要采取措施减少无关序列的干扰同时进一步富集病毒，样品类型液体类样品包括血液、血清、脑脊、液、精液等正常情况下病原菌极少，新鲜的样品宿主gDNA和rRNA等背景核酸含量较低,可以直接用于建库测序；

S2：物质去除，由于病毒颗粒远远小于细菌和其他细胞,可以通过离心、滤器过滤等物理方法去除样品中的细胞、细胞碎片及细菌等大颗粒物质；

S3：核酸提取，由于病毒颗粒具有一定的密度可以用超速离心处理样品，提高病毒的浓度和纯度然后提取病毒核酸，采用截留分子量为100kD的浓缩膜或超滤管对样品进行浓缩；

S4：核酸扩增，利用随机的6碱基引物在多位点和模板链结合,接着利用phi29DNA聚合酶很强的模板结合和置换能力实现对全基因组的扩增，扩增方法不依赖于病毒的核酸序列信息,且可对低浓度样品高效放大,因此在病毒核酸信息未知的情况下,可对临床样品进行高通量测序；

S5：核酸分析，对各个样本中核酸浓度、纯度和质量通过生物分析仪分析核酸，分别利用随机引物建库和oligo(dT)磁珠抓取建库的方法对病毒进行测序比较。

2.根据权利要求1所述的一种病毒核酸的建库方法，其特征在于，所述S1中，组织类样品,包括心脏、肝脏、肺脏等组织由于有大量宿主的核酸干扰测序前需要去掉宿主gDNA和rRNA等背景核酸；拭子类样品,包括咽拭子、鼻拭子、肛拭子等,不但有病原菌还存在大量正常寄生菌群,核酸背景复杂。

3.根据权利要求1所述的一种病毒核酸的建库方法，其特征在于，所述S2中，向样品中加入核酸酶不但能降解宿主的背景核酸同时也能降解游离的病原体核酸。由于大部分病毒核酸一般有衣壳包裹,存在于病毒颗粒内可以抵抗核酸酶的作用”，因此,可用DNase I降解游离的宿主gDNA,加入RNaseA降解游离的宿主rRNA。

4.根据权利要求1所述的一种病毒核酸的建库方法，其特征在于，所述S4中，核酸扩增的方案包括不依赖序列的单引物扩增、VIDISCA技术和随机PCR。