[发明专利]一种HDN染色液及其用于辣根过氧化酶特异性显色的试剂盒

说明书

本发明属于细胞染色以及试剂盒的技术领域，具体涉及一种HDN染色液及其用于辣根过氧化酶特异性显色的试剂盒。所述试剂盒包括HDN染色液，所述HDN染色液包括双氧水、缓冲液、硫酸镍铵、3,3’二氨基联苯胺以及氯化铵；所述试剂盒的免疫组织化学的方法如下：1）取被检活性组织切片，固定；2）用一抗检测欲发现的抗原或抗体；3）染色：将所得组织切片浸入HDN染色液中，待组织切片的阳性检测物呈现深紫蓝色；4）清洗组织切片；5）封片，观察组织切片。采用HDN染色液进行染色，得到的试剂盒的敏感度相比常法高10倍以上，可以显示常法染不出的物质，可以减少假阴性结果，避免漏诊。非阳性物质不染色，可以避免假阳性结果。

技术领域

本发明属于细胞染色以及试剂盒的技术领域，具体涉及一种HDN染色液及其用于辣根过氧化酶特异性显色的试剂盒。

背景技术

免疫组织化学或免疫细胞化学是用标记的抗体(或抗原)对动植物组织内的抗原或抗体、蛋白、核酸分子、神经递质和受体的分布及性质进行组织原位显示的技术，还可用于检测因伤病产生的变化，追踪神经联系和对病原体及毒物进行检测等，具有抗原抗体结合的高度特异性和组织原位显示的精确性。

免疫组织化学技术自1941年首次成功应用以来，发展迅速，先后建立了酶标抗体技术，如PAP、ABC、SPA等技术以及免疫电镜等技术，能在光学显微镜、荧光显微镜或电子显微镜下观察，免疫组织化学技术成为当今生物学、病理学和医学领域中显示细胞和组织的形态、功能、代谢综合研究的有力工具。

辣根过氧化酶(HRP)是一种比较常用的标记酶，主要应用于生物界和医学界，用于检测蛋白质、抗体、抗原、病原体、病毒等物质，其本身无色，要通过染色使其呈现颜色才能显示被标记的物质，现有技术常用的由DAB染色法，采用DAB染色液对辣根过氧化酶染色，其存在不敏感的问题，且特异性不强，染色组织的背地很深，会出现假阴性和假阳性的结果；而采用传统的免疫荧光染色的组织，会由于时间关系荧光减弱，在显微镜下一边观察一边褪色、不便于观察，且不能保存做复查使用，更不能做电镜观察超微结构。

本专利发明人舒斯云教授曾于国际杂志上发表了一篇论文，介绍了一种GDN染色方法，且该法被美国Imunostar的公司收入公司的免疫细胞化学手册，向全世界学界推荐。GDN染色方法的染色液包含硫酸镍铵、3,3’二氨基联苯胺、β-D葡萄糖以及葡萄糖氧化酶等物质，而该染色液中采用的β-D葡萄糖以及葡萄糖氧化酶不稳定，成本较高，操作步骤较为繁杂，因此，本发明在GDN染色法的技术上加以改进，并制成试剂盒，节省了费用，而且便于操作，以促进我国免疫细胞化学的研究发展以及推广应用。

发明内容

针对以上问题，本发明的目的在于提供一种HDN染色液及其用于辣根过氧化酶特异性显色的试剂盒，采用HDN染色液进行染色，得到的试剂盒的敏感度相比常法高10倍以上，效果稳定，可以显示常法染不出的物质，可以减少假阴性结果。而且背地很浅，可避免假阳性结果。

本发明的技术内容如下：

本发明提供了一种HDN染色液用于辣根过氧化酶特异性显色的试剂盒，所述试剂盒包括HDN染色液，所述HDN染色液包括双氧水以及缓冲液；

所述HDN染色液还包括硫酸镍铵、3,3’二氨基联苯胺以及氯化铵；

所述HDN的制备如下：硫酸镍铵和3,3’二氨基联苯胺溶于缓冲液加入氯化铵和双氧水即得到HDN染色液，所述缓冲液包括醋酸缓冲液，pH＝6；

所述试剂盒的快速免疫组织化学的方法如下：

1)固定：取被检活性组织切片，固定；

2)用一抗检测欲发现的抗原或抗体：将组织切片中滴入HRP标记的抗原或抗体(不包括在试剂盒中，根据需要采购)；

3)染色：将步骤2)所得组织切片浸入HDN染色液中，约5～10分钟，待组织切片中呈现深紫蓝色之后，于缓冲液中清洗终止反应；