[发明专利]一种人多能干细胞向外胚层分化的方法有效
| 申请号： | 202010127258.3 | 申请日： | 2020-02-28 |
| 公开（公告）号： | CN111269887B | 公开（公告）日： | 2021-11-16 |
| 发明（设计）人： | 刘中民;贾文文;鲁济真;汤红明 | 申请（专利权）人： | 上海市东方医院（同济大学附属东方医院） |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 吕纪涛 |
| 地址： | 200120 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 多能 干细胞 向外 胚层 分化 方法 | ||
1.一种人多能干细胞向外胚层分化的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将人多能干细胞经完全培养基重悬后接种于载体中，24h后更换外胚层分化第一阶段培养基；
2)诱导培养48h后，实现人多能干细胞的外胚层分化；
所述外胚层分化第一阶段培养基以DMEM/F12培养基或RPMI 1640培养基为基础培养基，包括1mg/ml血清白蛋白和1～5μM AM580；
所述血清白蛋白包括牛血清白蛋白或人血清白蛋白；
所述步骤2)诱导培养48h后还包括，更换外胚层分化第二阶段培养基，再诱导培养24h后，实现人多能干细胞的外胚层分化；
所述外胚层分化第二阶段培养基以DMEM/F12培养基或RPMI 1640培养基为基础培养基，包括1mg/ml血清白蛋白。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述人多能干细胞经TrypLE select或Accutase消化成单细胞后接种于载体中。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述完全培养基为含5～10μM Y27632的E8完全培养基或含5～10μM Y27632的mTeSR1完全培养基。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述载体包括培养板。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述培养板中包被有层粘连蛋白521、基质胶、层粘连蛋白511、Geltrex或玻连蛋白。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述人多能干细胞的接种量为1～5×104个/cm2。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)诱导培养的温度为37℃，所述诱导培养的CO2浓度为5％。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)诱导培养的温度为37℃，所述诱导培养的CO2浓度为5％。
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