[发明专利]一种检测EGFR基因L858R位点突变的试剂盒

说明书

本发明了公开了一种检测EGFR基因L858R位点突变的试剂盒，涉及核酸检测技术领域。该试剂盒包括：用于检测L858R位点突变的引物对、突变型荧光探针、野生型荧光探针、阳性质控品、阴性质控品和反应预混液。该试剂盒针对EGFR基因L858R位点设计了特定序列的引物和锁核酸探针，并优化了其反应体系，利用数字PCR平台实现了对EGFR基因L858R位点突变的高灵敏度检测，对低浓度DNA样本能够有效分辨低至1:3000的突变，操作简单，结果稳定，准确度高，数据扩增效果好，可广泛应用于非小细胞肺癌EGFR突变型的早筛和治疗过程中的耐药监测。

技术领域

本发明涉及核酸检测技术领域，具体涉及一种检测EGFR基因L858R位点突变的试剂盒。

背景技术

近年来，每年的新发癌症病例高达429万，其中肺癌位居发病率与死亡率第一位，分别占恶性肿瘤新发病例的13％和18％，尽管肺癌的诊断方法和治疗手段不断提高，但肺癌的死亡率仍未得到有效控制。在全部肺癌中，非小细胞肺癌(Non-Small Cell LungCancer,NSCLC)占80％以上，中国人群非小细胞肺癌患者最常见的致病突变来自表皮生长因子受体基因(epidermal growth factor receptor,EGFR)。

表皮生长因子受体(EGFR)是一种跨膜蛋白，广泛分布于人体各组织细胞膜上，是跨膜受体酪氨酸家族中的成员之一。由细胞外的配体结合区、疏水跨膜结构域和细胞内的激酶区三部分组成。EGFR基因可调控细胞的凋亡、增殖、分化、迁移和细胞周期循环，加快肿瘤细胞的增殖，促进新生血管生成，加速肿瘤转移并抑制肿瘤细胞凋亡。EGFR基因突变主要发生在第19-21号外显子上，包括第19号外显子的缺失突变(19del)，第20号外显子的点突变(T790M)和片段插入，以及第21号外显子的点突变(如：L858R、L861Q等)。在肿瘤的治疗中，酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)通过与EGFR胞外配体结合部位的竞争，阻断EGFR信号通路，从而起到抗肿瘤的作用。然而，相当一部分患者会出现耐药性，这种获得性耐药主要由基因的二次突变引起的，常见的突变包括：T790M和L858R等。

近年来，以血液等为样本基础的液体活检技术飞速发展。当肿瘤组织难以获取时，无创、易采集的血液检测是组织EGFR基因突变分析合适的替代选择，并且血液检测在一定程度上能有效克服肿瘤异质性，可实现无创实时动态检测等，广泛应用于肺癌早筛和治疗中耐药性监测。由于血液中游离DNA含量极低，长度约70-200bp，其中突变相关游离DNA(cell free DNA,cfDNA)含量更少，约占总游离DNA含量的1％，普通试剂盒精密度和灵敏度无法达到检测要求。