[发明专利]一种基于双水相体系的载酶海藻酸钙微球强化级联酶促反应方法

权利要求书

1.一种基于双水相体系的载酶海藻酸钙微球制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：分别配置质量浓度为8％的PEG水溶液和质量浓度8％的Dex水溶液；充分混合后分相，上相为PEG溶液，下相为Dex溶液；

步骤2：Dex溶液中加入海藻酸钠和目标酶溶液，形成含目标酶的Dex-海藻酸钠溶液，其中海藻酸钠的质量浓度为0.5％；

步骤3：以步骤1制备得到的PEG溶液为外水相，以步骤2得到的含目标酶的Dex-海藻酸钠溶液为内水相，通过同轴毛细管在其锥尖处形成双水相海藻酸钠液滴；

步骤4：将步骤3得到的双水相海藻酸钠液滴导入PEG-氯化钙水溶液中即生成载酶海藻酸钙微球。

2.采用如权利要求1的基于双水相体系的载酶海藻酸钙微球强化级联酶促反应方法，其特征在于，将步骤4得到的载酶海藻酸钙微球加入PEG-葡萄糖溶液中即可发生联酶促反应。

3.根据权利要求1所述的一种基于双水相体系的载酶海藻酸钙微球制备方法，其特征在于，所述步骤1中PEG水溶液和Dex水溶液通过旋转培养器充分混合，静置12小时后分相。

4.根据权利要求1所述的一种基于双水相体系的载酶海藻酸钙微球制备方法，其特征在于，所述步骤2中的目标酶为葡萄糖氧化酶和辣根过氧化物酶；目标酶的Dex-海藻酸钠溶液中，葡萄糖氧化酶浓度为5μg/mL、辣根过氧化物酶浓度为5μg/mL、葡萄糖氧化酶和辣根过氧化物酶浓度均为5μg/mL或葡萄糖氧化酶和辣根过氧化物酶浓度均为2.5μg/mL。

5.根据权利要求1所述的一种基于双水相体系的载酶海藻酸钙微球制备方法，其特征在于，所述步骤3中外水相和内水相均通过空气泵进行进样，外水相进样压强为0.030MPa，内水相进样压强为0.015MPa～0.030MPa；内水相进样过程中开启空气泵0.2s，关闭1.5s作为一个进样周期。

6.根据权利要求1所述的一种基于双水相体系的载酶海藻酸钙微球制备方法，其特征在于，所述步骤4中载酶海藻酸钙微球的直径范围为200～400μm。

7.根据权利要求1所述的一种基于双水相体系的载酶海藻酸钙微球制备方法，其特征在于，所述步骤4中的PEG-氯化钙水溶液为步骤1中的PEG溶液中添加氯化钙形成，其中氯化钙的浓度为质量浓度10％。

8.根据权利要求2所述的一种基于双水相体系的载酶海藻酸钙微球强化级联酶促反应方法，其特征在于，所述PEG-葡萄糖溶液为步骤1中的PEG溶液中添加葡萄糖形成，其中葡萄糖的浓度为23.25mmol/L。