[发明专利]一种利用斑马鱼评估离子液体对脂代谢影响的方法

说明书

本发明涉及环境毒理学模型领域，具体涉及一种利用斑马鱼评估离子液体对脂代谢影响的方法。本发明以斑马鱼作为实验对象，斑马鱼在一定浓度的离子液体中进行急性暴露后，测定影响肝脏代谢的相关激素、肝脏代谢相关的生理生化指标、肝脏脂代谢相关基因的表达，观察肝脏组织学切片。通过分析暴露过后斑马鱼中上述指标的变化，全面、准确的评价离子液体对肝脏脂代谢毒性的影响。为水生生态环境污染物标准的制定提供依据。

技术领域

本发明涉及环境毒理学模型领域，具体涉及一种利用斑马鱼评估离子液体对脂代谢影响的方法。

背景技术

离子液体（Ionic Liquid）是指由有机阳离子和无机或有机阴离子组成的一类液体。自1914年Walden发现并合成第一种离子液体硝基乙胺后，关于离子液体的合成便成为研究者们研究的热点，各种离子液体被相继研发出来。根据其组成中不同的有机阳离子可以简单分为二烷基咪唑离子、烷基季磷离子、烷基吡啶离子以及烷基季铵离子。由于其不挥发、不可燃、导电性强等诸多优点，离子液体被广泛应用于电化学、催化、分离等领域。然而随着大量离子液体产品的研发、生产和使用，使得离子液体不可避免的排入到环境当中。已有毒理学研究表明，离子液体会损伤模式生物的肝脏，诱导人体肝癌细胞（HepG2）凋亡。而肝脏作为代谢的中心，关于离子液体对肝脏的脂代谢毒性却并未有专门的研究。

斑马鱼作为一种近年来兴起的模式生物，由于其基因序列与人类的基因序列高度相似、繁殖周期短、养殖方便、成本低等特点，被广泛运用在毒理学、药理学、神经生物学、遗传学等领域。斑马鱼组织器官的形态结构、生理功能及病理反应与人体相似，是一种理想的研究肝脏的模式生物，在毒理学中还未发现以斑马鱼为研究对象评价研究污染物或潜在环境污染物对肝脏的代谢毒性。

发明内容

为了解决上述问题，本发明旨在提供一种经济易行的利用斑马鱼评估离子液体对脂代谢影响的方法。

本发明采用的技术方案如下：

本发明提供了一种利用斑马鱼评估离子液体对脂代谢影响的方法，所述方法包括以下步骤：

（1）取同批次健康斑马鱼若干条，适宜环境中驯养一段时间后随机分成数组，每组不少于10条；将空白组外的其他组放入不同暴露环境中进行暴露实验；

（2）对暴露实验后的斑马鱼脂代谢相关指标进行检测，麻醉后取肝脏进行组织学切片并观察；

（3）对步骤（2）中的数据进行统计学分析，分析暴露实验后斑马鱼脂代谢受到的影响，评估不同暴露浓度对脂代谢的毒性。

本发明中步骤（1）所述的暴露环境为含有一定浓度离子液体的培养溶液，所述的离子液体为咪唑类离子液体，优选为1-丁基-3-甲基咪唑氯盐 ( [Bmim]Cl )，所述离子液体的浓度为50~400mg/L。

步骤（1）所述的暴露实验为斑马鱼放入暴露溶液中培养15d，保持14h光照10h黑暗，每24h换一次液。

步骤（2）中所述的脂代谢相关指标包括：相关激素、生理生化指标和/或肝脏脂代谢相关基因的表达。

进一步地，所述的相关激素为胰岛素及胰高血糖素，所述的生理生化指标为甘油三酯；所述的肝脏脂代谢相关基因为MCAT、DBT、LIPCA、GPD1L、PLPP1a、GPAT3、LOC、INS、gcga、INSR和/或GCGR中的一种或多种。

步骤（3）中所述的统计学分析为使用IBM SPSS Statistic 19对步骤（2）中数据进行分析。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：