[发明专利]同时检测多种脂溶性维生素和同型半胱氨酸的方法

权利要求书

1.同时检测多种脂溶性维生素和同型半胱氨酸的方法，其特征在于：包括如下步骤：

对血清样品进行前处理，前处理方法为：向血清样品中加入1,4-二硫苏糖醇，混匀后，再加入蛋白沉淀剂进行处理；

从前处理后的血清样品中萃取脂溶性维生素和同型半胱氨酸；

将萃取液经过吹干、复溶后，上液相色谱质谱联用系统进行进样分析；

所述萃取剂为正己烷；

其中，液相色谱流动相：A：0.1％甲酸+水；B:0.1％甲酸+乙腈+异丙醇，乙腈和异丙醇的体积比为2-3:10-15，液相色谱的梯度洗脱程序为：0-0.4min，流动相A的体积百分数一直为60％；0.4-1.5min，流动相A的体积百分数由60％逐渐降为40％；1.5-2.5min，流动相A的体积百分数由40％逐渐降为0；2.5-4.5min，流动相A的体积百分数一直为0；4.5-4.51min，流动相A的体积百分数升至60％；4.51-5.0min，流动相A的体积百分数一直为60％；

所述多种脂溶性维生素为：维生素A、25OH-VD2、25OH-VD3、维生素E、维生素K；

液相色谱检测条件为：Phenomenex Kintex C18，30*3mm，2.6μm；流速：0.7ml/min；柱温：40℃；

质谱条件：

离子源：APCI源；NC:5.0；TEM:450；CAD:6；CUR:25；GS1:50；

质谱离子对，如下表 所示；

数据采集方式：多反应监测模式MRM；

雾化气温度：450℃；

雾化气气流：5.0L/min；

毛细管电压：4500V；

离子源：大气压电离源APCI；

离子模式：正离子模式。

2.根据权利要求1所述的同时检测多种脂溶性维生素和同型半胱氨酸的方法，其特征在于：1,4-二硫苏糖醇溶液的浓度为70-120μg/ml。

3.根据权利要求2所述的同时检测多种脂溶性维生素和同型半胱氨酸的方法，其特征在于：所述1,4-二硫苏糖醇的浓度为100μg/ml。

4.根据权利要求2所述的同时检测多种脂溶性维生素和同型半胱氨酸的方法，其特征在于：血清样品与1,4-二硫苏糖醇溶液的体积比为3.5-4.5:1。

5.根据权利要求1所述的同时检测多种脂溶性维生素和同型半胱氨酸的方法，其特征在于：所述蛋白沉淀剂为甲醇和水的混合液，其中，水的质量百分数为1％-10％。

6.根据权利要求1所述的同时检测多种脂溶性维生素和同型半胱氨酸的方法，其特征在于：蛋白沉淀剂中，水的质量百分数为2％。

7.根据权利要求1所述的同时检测多种脂溶性维生素和同型半胱氨酸的方法，其特征在于：血清与蛋白沉淀剂的体积比为1:1.2-2。

8.根据权利要求1所述的同时检测多种脂溶性维生素和同型半胱氨酸的方法，其特征在于：采用氮气将萃取液吹干。

9.根据权利要求1所述的同时检测多种脂溶性维生素和同型半胱氨酸的方法，其特征在于：所述复溶的复溶剂为95％甲醇水溶液。