[发明专利]一种裂解多糖单加氧酶及制备方法

权利要求书

1.一种裂解多糖单加氧酶编码基因PdLPMO9A，其特征在于，所述裂解多糖单加氧酶编码基因PdLPMO9A的编码序列如SEQ ID NO:1所示。

2.如权利要求1所述裂解多糖单加氧酶编码基因PdLPMO9A编码的裂解多糖单加氧酶，其特征在于，所述裂解多糖单加氧酶的氨基酸序列具有如下特征：序列表中SEQ ID NO:2从氨基酸开始的第1-321或第19-321位氨基酸残基序列。

3.如权利要求2所述的裂解多糖单加氧酶的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）目的基因的克隆

通过PCR技术扩增获得裂解多糖单加氧酶编码基因PdLPMO9A的编码序列如SEQ ID NO:1所示；

（2）重组表达载体pPICZαA-PdLPMO9A的构建

首先预测裂解多糖单加氧酶信号肽，然后采用PCR扩增引物，去除裂解多糖单加氧酶信号肽，并扩增得到裂解多糖单加氧酶成熟肽编码序列，通过同源重组的方法，将裂解多糖单加氧酶成熟肽编码序列正确插入到pPICZαA载体XhoI位点，获得重组表达载体pPICZαA-PdLPMO9A，其中裂解多糖单加氧酶成熟肽编码序列终止密码子之前不加His标签；

其中所述扩增引物如下：

上游引物：5’GAAGGGGTATCTCTCGAGAAAAGACACACCATTTTCCAGGA3’

下游引物：5’AGATGAGTTTTTGTTCTAGATTATTGGCATTGATGGTAGTAGGGGT3’

（3）转基因菌株的获得

采用电转化法将重组表达载体pPICZαA-PdLPMO9A导入宿主细胞毕赤酵母Pichia pastoris GS115菌株中；

裂解多糖单加氧酶的获得

采用甲醇诱导裂解多糖单加氧酶表达。