[发明专利]铁皮石斛中菲类化合物的制备方法

权利要求书

1.一种铁皮石斛中菲类化合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

1)利用醇溶液对铁皮石斛进行至少一次回流提取，浓缩，得到浓缩液；

2)对所述浓缩液依次进行至少一次石油醚萃取、至少一次乙酸乙酯萃取和至少一次正丁醇萃取，依次得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；

3)将所述石油醚萃取物上样于硅胶柱色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯溶液梯度洗脱，依次得到含有菲类化合物9的流分以及含有菲类化合物10和菲类化合物11的流分，进一步纯化，分别得到菲类化合物9，菲类化合物10和菲类化合物11；

4)将所述乙酸乙酯萃取物上样于硅胶柱色谱分离，以二氯甲烷-甲醇溶液梯度洗脱，依次得到含有菲类化合物3、菲类化合物7和菲类化合物8的流分以及含有菲类化合物4、菲类化合物5和菲类化合物6的流分，进一步纯化，分别得到菲类化合物3、菲类化合物4、菲类化合物5、菲类化合物6、菲类化合物7和菲类化合物8；

5)将所述正丁醇萃取物上样于硅胶柱色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，依次得到含有菲类化合物14的流分以及含有菲类化合物12和菲类化合物13的流分，进一步纯化，分别得到菲类化合物12，菲类化合物13和菲类化合物14；

所述菲类化合物3～14的结构如下所示：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中，以所述石油醚-乙酸乙酯溶液梯度洗脱具体为：以石油醚与乙酸乙酯的体积比由100:0逐渐变为1:1进行梯度洗脱。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤3)中，将所述含有菲类化合物9的流分上样于硅胶柱色谱纯化，以石油醚与乙酸乙酯的体积比由100:0逐渐变为1:1进行梯度洗脱，得到目标流分，从而得到所述菲类化合物9。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤3)中，将所述含有菲类化合物10和菲类化合物11的流分上样于葡聚糖凝胶柱色谱分离，以体积比1～5:1的二氯甲烷-甲醇溶液等度洗脱，分别得到含有菲类化合物10的流分和含有菲类化合物11的流分，从而分别得到所述菲类化合物10和所述菲类化合物11；

优选地，步骤3)中，先将所述含有菲类化合物10和菲类化合物11的流分上样于硅胶柱色谱纯化，以石油醚与乙酸乙酯的体积比由100:0逐渐变为1:1进行梯度洗脱，得到的目标流分上样于葡聚糖凝胶柱色谱分离；

优选地，步骤3)中，所述含有菲类化合物10的流分经制备薄层色谱纯化，以体积比15～25:1的二氯甲烷-甲醇溶液等度洗脱，得到所述菲类化合物10；所述含有菲类化合物11的流分经高效液相色谱纯化，以体积分数40％～50％的甲醇溶液为流动相，得到所述菲类化合物11。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)中，所述二氯甲烷-甲醇溶液梯度洗脱具体为：以二氯甲烷与甲醇的体积比由100:0逐渐变为1:1进行梯度洗脱。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤4)中，将所述含有菲类化合物3、菲类化合物7和菲类化合物8的流分经硅胶柱色谱分离，以二氯甲烷与丙酮的体积比由20:1逐渐变为1:1进行梯度洗脱，得到含有菲类化合物7的流分以及含有菲类化合物3和菲类化合物8的流分，从而得到菲类化合物7；所述含有菲类化合物3和菲类化合物8的流分经制备型高效液相色谱分离，以体积分数50％～60％的甲醇溶液为流动相，从而分别得到所述菲类化合物3和所述菲类化合物8；

优选地，步骤4)中，先将所述含有菲类化合物7的流分上样于葡聚糖凝胶柱色谱纯化，以体积比1～5:1的二氯甲烷-甲醇溶液等度洗脱，得到目标流分，从而得到所述菲类化合物7，或者对该目标流分进行进一步纯化，从而得到所述菲类化合物7；

更优选地，步骤4)中，所述对该目标流分进行进一步纯化的具体操作为，该目标流分经制备型高效液相色谱纯化，以体积分数30％～40％的甲醇溶液为流动相；

优选地，步骤4)中，所述含有菲类化合物3和菲类化合物8的流分先经葡聚糖凝胶柱色谱纯化，以体积比1～5:1的二氯甲烷-甲醇溶液等度洗脱，得到的目标流分再经该制备型高效液相色谱分离。