[发明专利]一种土赤壳属真菌的特异性引物、试剂盒及分子检测方法有效
申请号: | 202010133777.0 | 申请日: | 2020-02-28 |
公开(公告)号: | CN111154909B | 公开(公告)日: | 2022-12-13 |
发明(设计)人: | 高微微;卢晓红;焦晓林;张西梅;邵慧慧;毕艳孟;李俊飞 | 申请(专利权)人: | 中国医学科学院药用植物研究所 |
主分类号: | C12Q1/6895 | 分类号: | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645 |
代理公司: | 北京睿阳联合知识产权代理有限公司 11758 | 代理人: | 张颖;王朋飞 |
地址: | 100193 北*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 土赤壳属 真菌 特异性 引物 试剂盒 分子 检测 方法 | ||
本发明涉及用于检测土赤壳属真菌的特异性引物对及其应用,具体公开了通过PCR扩增检测土赤壳属真菌的特异性引物、检测方法及试剂盒。本发明的引物对、试剂盒以及检测方法能够对样品中是否存在土赤壳属真菌的进行检测,具有特异性强、灵敏度高、简单快速的特点,可用于快速、灵敏地检测植物、土壤、水等环境中的土赤壳属真菌,对快速诊断、早期预警病害发生和指导病害防治具有重要意义。
技术领域
本发明属于病原菌检测领域,尤其是涉及植物病原真菌的分子检测。
背景技术
土赤壳属(Ilyonectria)是2011年建立的新属,在分类地位上属于子囊菌门(Ascomycota)、盘菌亚门(Pezizomycotina)、粪壳菌纲(Sordariomycetes)、肉座菌亚纲(Hypocreomycetidae)、肉座菌目(Hypocreales)、丛赤壳科(Nectriaceae)。“ilyo”在希腊语中是“泥土”的意思,因其为土壤栖居菌而获此属名,通常以无性型进行繁殖与侵染,其模式种为I.radicicola,有性型特征为子囊壳单生,表面具有疣状物,子囊壳壁外层由薄壁的球形大细胞构成,子囊孢子表面光滑;无性型以产生小分生孢子和厚垣孢子而区别于其他属(Booth,1996;Mantiri et al.,2001;Samuels and Brayford,1990)。
土赤壳属真菌引起多种植物根部病害,并且同一种植物病害通常由多种土赤壳真菌引起。例如引起西洋参锈腐病的病原菌主要包括I.crassa、I.mors-panacis和I.vredehoekensis(Cabral et al.,2012a;Seifert et al.,2003;Zhang et al.,2019)。引起葡萄黑根病的病原菌包括I.estremocensis、I.alcacerensis、I.novozelandica、I.macrodidyma和I.vivaria等(Cabral et al.,2012b;Berlanas et al.,2020)。引起山龙眼科花卉植物黑根病的病原菌包括I.capensis、I.leucospermi、I.protearum和I.vredehoekensis等(Lombard et al.,2013)。在我国,共报道了10个种的Ilyonectria属真菌:I.mors-panacis,I.robusta,I.changbaiensis,I.communis、I.qitaiheensis、I.vredehoekensis、I.hubeiensis、I.radicicola、I.estremocensis、I.pseudodestructans(Lu et al.,2019;Zhang et al.,2019;Zhuang et al.,2007;ZengZhuang,2013;Mao et al.,2014;Lu et al.,2014;王玉君等,2015),他们大多数为人参、西洋参、三七等名贵中药材的病原菌,给这些名贵中药材的生产带来了严重的经济损失。
土赤壳属真菌多为土壤习居菌,寄生性较弱,能够产生大量厚垣孢子在土壤中长期存活(Chaverri et al.,2011),只有当环境条件适宜时才会侵染寄主植物引起病害的发生(Tewoldemedhin et al.,2011a;Tewoldemedhin et al.,2011b)。因此,通常情况下,即使田间未观察到病害,土壤或植物体内也很有可能已经存在该类病原物,所以及时检测土壤、植物体中的土赤壳属真菌,尽早采取病害预防措施以避免病害的发生发展尤为重要。
目前对于土赤壳属真菌的检测主要采用常规分离培养鉴定的方法。然而,土赤壳属真菌的生长速度通常较慢,常受其他真菌菌落的限制,甚至被其他真菌菌落覆盖而影响分离;培养鉴定对操作人员的技术要求高,时间周期长。分子检测的方法有多重巢式PCR(multiplex nested PCR),需要采用两对引物分别进行PCR,不仅耗时,而且多次PCR可能增加系统误差(Agustí-Brisach et al.,2013)。所以需要改进现有的土赤壳属真菌的检测方法,建立高效、省时、简便、高灵敏度,并且满足同时检测引起同一种病害的所有土赤壳属真菌要求的方法。
发明内容
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