[发明专利]一种快速检测七种冠状病毒和其他呼吸道病原体的探针及引物组合物

说明书

本发明公开了一种快速检测七种冠状病毒和其他呼吸道病原体的探针及引物组合物，主要是根据OC43‑CoV、NL63‑CoV、229E‑CoV、HKU1‑CoV、SARS‑CoV、FluB、RSV的N基因；MERS‑CoV的ORF1a、ORF1b、N基因；2019‑nCoV的ORF1ab、N基因；FluA的M基因；HadV的HEXON基因的特异性设计一组特异性引物及Taqman或MGB探针，利用熔解曲线技术，根据熔解温度的变化快速鉴定CoV‑OC43、HCoV‑NL63、HCoV‑229E、HCoV‑HKU1、SARS‑CoV、MERS‑CoV、2019‑nCoV、FluA、FluB、HAdV、RSV。该设计能够实现一个荧光通道中同时检测多种病原体，并能够满足较高的灵敏度。

技术领域：

本发明属于核酸检测技术领域，具体涉及一种检测冠状病毒OC43、冠状病毒NL63、冠状病毒229E、冠状病毒HKU1、SARS冠状病毒、MERS冠状病毒、新型冠 状病毒(2019-nCoV)、甲型流感病毒、乙型流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病 毒的试剂盒及检测方法领域。

背景技术：

冠状病毒(Coronavirus，CoV)属巢状病毒目，冠状病毒科，是一类有包 膜的正链RNA病毒，全长在26-32kb之间，分为α、β、γ三个属。α、β属仅 对哺乳动物致病，γ属主要引起鸟类感染，CoV主要通过直接接触分泌物或经气 溶胶、飞沫传播，也有证据表明可经粪口途径传播。冠状病毒在自然界的感染 谱非常广泛，常见的哺乳类动物如犬、猫、鼠、猪、牛及家禽类等都易感。近 年来，又从白鲸、骆驼、蝙蝠体内分离到多种类型的冠状病毒。到目前为止， 引起人类呼吸道疾病的人冠状病毒(HCoV)已达7种：HCoV-OC43、HCoV-NL63、 HCoV-229E、HCoV-HKU1、SARS-CoV、MERS-CoV和新型冠状病毒(2019-nCoV)， 是人呼吸道感染的重要病原体。其中，2019-nCoV于2019年被发现，临床表现为 发热、乏力等全身症状，伴有干咳，呼吸困难等，可迅速发展为重症肺炎、呼 吸衰竭、急性呼吸窘迫综合征，脓毒性休克，多器官功能衰竭，严重酸碱代谢 紊乱等，甚至危及生命。

流感是由流感病毒引起急性呼吸道传染病，主要传播方式是空气飞沫传播。 流感病毒分为甲型、乙型和丙型。甲型流感病毒(Influenza A virus，FluA) 根据表面血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的不同分为16个HA亚型和9个NA亚型， 甲型流感病毒最容易发生变异，容易引起爆发流行；乙型流感病毒(Influenza B virus，FluB)变异较少，丙型流感病毒较稳定，多引起散发病例。流感是一 种季节性疾病，在温带地区，流感会在整个冬季流行，在热带地区，流感病毒 一年四季均存在，雨季流行多见。一般来说，仅约50％左右的感染病人会发展成 典型流感临床症状。流感典型症状以突然发热、头晕头痛、肌痛为特点，同时可伴有喉咙痛和咳嗽、鼻塞、流涕、胸痛、眼痛、畏光等症状。发热体温可达 39～40℃，一般持续2～3天后渐退。甲型和乙型流感的临床症状相似，乙型流 感通常有肌炎及胃肠道症状。

人腺病毒(Human adenoviruses,HAdV)属于哺乳动物腺病毒属，是一群分 布广泛的、无包膜的双链DNA病毒，1953年由Rowe等首次发现。目前已发现至 少90个基因型，分为A-G共7个亚属，不同型别HAdV的组织嗜性、致病力、流行 地区等特性不同。HAdV感染可引起多种疾病，包括肺炎、支气管炎、膀胱炎、 眼结膜炎、胃肠道疾病及脑炎等。与呼吸道感染相关的HAdV主要有B亚属 (HAdV-3、7、11、14、16、21、50、55型)，C亚属(HAdV-1、2、5、6、57 型)和E亚属(HAdV-4型)。腺病毒肺炎约占社区获得性肺炎的4％-10％，重症 肺炎以3型及7型多见，HAdV-7B型是2019年我国南方发病地区主要流行株。