[发明专利]靶向光声成像纳米分子探针及其应用

权利要求书

1.一种靶向光声成像纳米分子探针的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

将HSA通过Sulfo-SMCC耦联RGD活性短肽，其中，HSA与RGD活性短肽耦联方法如下：

(1)RGD活性短肽的巯基化：

RGD活性短肽与Traut's Reagent摩尔比为1:2，分别称取0.02mmol RGD活性短肽50mg与0.04mmol Traut's Reagent 5.6mg，将50mg RGD活性短肽溶于5mL SB Buffer，将5.6mgTraut's Reagent溶于1mL SB Buffer，将两者混合后，室温震荡反应1h，移至4℃保存待用；

(2)HSA与Sulfo-SMCC连接：

Sulfo-SMCC与HSA摩尔比为7.5:1，称取40mg HSA溶于PBS溶液，取2mg Sulfo-SMCC溶于0.2mL DMSO，混合后室温下搅拌反应30min，而后使用分子量为30KD的超滤管离心纯化三次，以除去游离的Sulfo-SMCC；

(3)HSA-SMCC上的马来酰亚胺与RGD活性短肽上的巯基耦联：

取1.8mL第(1)步巯基化后的RGD活性短肽溶液加入4mL HSA-SMCC溶液中，室温下搅拌反应2h，然后使用分子量为30KD的超滤管离心纯化三次，最终溶于4mL的超纯水中，此时HSA-RGD peptide终浓度为10mg/mL；

制备ICG-HSA-RGD peptide纳米探针fNPs，方法如下:

(4)配制10％HSA溶液1mL；

(5)设定HSA-RGD peptide，10％HSA两种溶液中HSA的质量比为5：2，HSA总质量为30mg，根据其各自浓度算出相应体积；

(6)高温消毒蒸干后的玻璃小瓶中放入磁子，依次加入上一步算得体积的两种溶液，然后加入PBS溶液，使溶液总体积为3mL，将小瓶置于磁力搅拌器上搅拌；

(7)称取2mg ICG超声震荡溶于20μL DMSO；

(8)将10μLICG溶液在搅拌状态下逐滴缓慢加入第(6)步HSA溶液中；

(9)将20μL戊二醛加入2mL PBS溶液中，充分震荡溶解后，取200μL缓慢加入上述溶液中，避光搅拌30h，

(10)使用分子量为100KD的超滤管离心纯化三次，最终溶于PBS溶液中；

最终形成纳米分子探针；

其中，所述SB Buffer为0.2M,pH 8的SB Buffer，所述PBS溶液为0.1M，pH7.4的PBS溶液。