[发明专利]白鲜皮中抗病毒活性部位、制备方法、含量测定方法及其应用

权利要求书

1.一种白鲜皮抗病毒活性部位，其特征在于，该活性部位总柠檬苦素类含量为50％以上，并含有柠檬苦素、黄柏酮、梣酮、梣皮酮和前黄柏酮。

2.根据权利要求1所述的活性部位，其特征在于，该活性部位总柠檬苦素类含量为80％以上，并含有柠檬苦素、黄柏酮、梣酮、梣皮酮和前黄柏酮。

3.根据权利要求1-2任一项所述的活性部位在制备抗病毒药物中的应用。

4.根据权利要求3所述的活性部位，其特征在于，该活性部位在制备抗病毒药物中的应用。

5.根据权利要求1-2任一项所述一种白鲜皮抗病毒活性部位的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：

(1)提取：取白鲜皮粉碎，加入6～10倍量石油醚，于70℃水浴回流提取2次，每次1h，合并滤液。过滤，药渣加入6～10倍量二氯甲烷，于85℃水浴回流提取2次，每次1h，过滤，合并滤液。浓缩，得到浓缩浸膏。

(2)除杂：大孔树脂柱层析，将上述提取所得浓缩浸膏用1:1～1:2的纯水溶解后，进行大孔树脂吸附，然后先用1～5倍柱体积的纯水洗脱除去水溶性杂质；再用1～6倍柱体积的体积分数为60～80％的乙醇水溶液洗脱；收集体积分数为60～80％的乙醇水溶液洗脱部位，浓缩干燥得大孔树脂柱层析活性部位。

(3)纯化：用制备液相色谱继续分离得到的洗脱液，分离条件：色谱柱为Agilent制备柱Zorba x SB-C18；21.2mm×250mm，流动相为甲醇-水溶液，进行梯度洗脱，所述梯度洗脱程序如下：0-30min，甲醇相从10％升为40％，40-60min，甲醇相从40％升为95％。流速为10ml/min，柱温为室温；样品用色谱级甲醇溶解，经制备液相色谱分离，在时间段5-15分钟收集溶液，收集液浓缩干燥后得到白鲜皮抗病毒活性部位。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，除杂步骤中大孔树脂柱型号可以是DH101、DM-130、AB-8。

7.一种白鲜皮中抗病毒活性部位的含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)供试品制备：精密称取10.0mg白鲜皮中抗病毒活性部位，用色谱纯甲醇溶解且定容至10ml容量瓶中，用0.45微米微孔滤膜过滤，即得到白鲜皮抗病毒活性部位供试品；

(2)：对照品溶液制备：精密称定经干燥过的柠檬苦素、黄柏酮、梣酮、梣皮酮和前黄柏酮对照品各5.0mg，置10mL的量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，制成白鲜皮柠檬苦素类混合对照品储备液，-4℃冰箱放置，备用。

(3)：对步骤(1)制备的供试品进行高效液相色谱测定，并以步骤(2)制备柠檬苦素、黄柏酮、梣酮、梣皮酮和前黄柏酮对照品进行含量测定；HPLC条件为：色谱柱填料为AglientC18，规格为250mm×4.6mm 5μm，波长为210nm，流动相为甲醇-水溶液，梯度洗脱为：0-30min，甲醇相从10％升为65％，30-35min，甲醇相保持65％，35-40min，甲醇相从65％升为95％，40-60min，甲醇相95％等度洗脱；流速为1ml/min，柱温为30℃。