[发明专利]C-P串联表达重组蛋白及其基因、制备方法、应用、C肽检测试剂盒

说明书

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种C‑P串联表达重组蛋白及其基因、制备方法、应用、C肽检测试剂盒。该C‑P串联表达重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示。本发明使用体外合成C‑P多肽或选择人C‑P的氨基酸对应的核酸序列进行重组表达，在制备/表达之前将C‑P氨基酸对应序列串联后表达出融合两分子C‑P氨基酸的串联C‑P蛋白，制备之后其C‑P的稳定性得到显著提高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种C-P串联表达重组蛋白及其基因、制备方法、应用、C肽检测试剂盒。

背景技术

C肽(C-P)是胰岛β细胞的分泌产物，它与胰岛素有一个共同的前体—胰岛素原。一个分子的胰岛素原在特殊的作用下，裂解成一个分子的胰岛素和一个分子的C肽，因此在理论上C肽和胰岛素是等同分泌的，血中游离的C肽生理功能尚不很清楚，但C肽不被肝脏破坏，半衰期较胰岛素明显为长，故测定C肽水平更能反应β细胞合成与释放胰岛素功能。对已经用胰岛素治疗的病人，体内产生的胰岛素抗体可干扰胰岛素测定；同时现在采用的放免法测定胰岛素，也分辨不出是内生的还是外源性胰岛素，给了解β细胞的功能带来困难，而C肽与胰岛素之间有相当稳定的比例关系，且不受胰岛素抗体的干扰，注射的外源性胰岛素又不含C肽，所以测定血中C肽水平，可以反映内生胰岛素的水平，即可了解β细胞的功能。

检测C肽对糖尿病预防和治疗具有重要的临床意义：

(1)测定C肽，有助于糖尿病的临床分型，有助于了解患者的胰岛功能。

(2)因为C肽不受胰岛素抗体干扰，对接受胰岛素治疗的患者，可直接测定C肽浓度，以判定患者的胰岛β细胞功能。

(3)可鉴别低血糖的原因。若C肽超过正常，可认为是胰岛素分泌过多所致，如C肽低于正常，则为其它原因所致。

(4)C肽测定有助于胰岛细胞瘤的诊断及判断胰岛素瘤手术效果，胰岛素瘤血中C肽水平偏高，若手术后血中C肽水平仍高，说明有残留的瘤组织，若随访中C肽水平不断上升，揭示肿瘤有复发或转移的可能。

目前实验室检测C肽的方法比较多，常用方法有放射免疫分析法、酶联免疫分析法、化学发光免疫分析法、电化学发光免疫分析法等。随着生物科技的发展，其检测方法也逐步由放射免疫学的检测方法，逐渐向酶联免疫吸附试验、化学发光免疫分析法发展。放射性免疫分析法由于试剂具有放射性，对操作者具有一定的危害，且操作复杂，试剂有效期短等缺点，不推荐作为C肽临床诊断；酶联免疫分析法的缺点在于无法准确进行定量，且批间差异较大，线性范围有限，无法持续监控C肽水平；化学发光免疫分析法是一种较为先进的免疫学方法，具有高灵敏、高特异、快速、高通量等特点。现阶段化学发光法已成为检测C肽水平的主流方法，并且由于自动化检测系统的普及，极大地提升了实验的精密度。根据目前C肽的临床的应用情况，市场应用前景较好的可靠方法为化学发光免疫分析法。化学发光免疫分析法主要有微孔板式化学发光、微孔板式磁颗粒化学发光、时间分辨荧光免疫分析法和光激化学发光法。

使用多肽(体外合成/合成肽)作为C肽体外诊断试剂盒的组成成分已很常见，但C肽的稳定性较差。如何提高多肽(体外合成/合成肽)或某些蛋白的稳定性一直是困扰试剂和开发人员的难题。

发明内容

鉴于此，本发明提供了C-P串联表达重组蛋白及其基因、制备方法、应用、C肽检测试剂盒。该C-P标准品的稳定性得到明显的提高。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种C-P串联表达重组蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示。

本发明还提供了编码该C-P串联表达重组蛋白的基因，其核苷酸序列如SEQ IDNO：6所示。