[发明专利]脂肽类化合物Totopotensamides及其制备方法和应用

权利要求书

1.化合物Totopotensamides R1-1、P2-1或H1，结构如下所示：

2.重组菌株Streptomycespactum SCSIO 02999/ΔtotR5i/pPWW50-totR1在制备化合物R1-1到R1-6中的应用，所述的重组菌株Streptomycespactum SCSIO 02999/ΔtotR5i/pPWW50-totR1是将S.pactum SCSIO 02999菌株中的Totopotensamides生物合成基因簇中的负调控基因totR5进行敲除、同时将正调控基因totR1进行超表达得到；

所述的化合物R1-1到R1-6的结构式如下所示：

R1-1 R1＝CH3；R2＝Cl ；R3＝CH3；

R1-2 R1＝CH3；R2＝Cl ；R3＝CH3；

R1-3 R1＝CH3；R2＝Cl ；R3＝CH3；

R1-4 R1＝CH3；R2＝Cl ；R3＝CH3；

R1-5 R1＝CH3；R2＝Cl ；R3＝CH3；

3.重组菌株S.pactum SCSIO 02999/ΔtotR5i/pPWW50-totR2在制备化合物R2-1中的应用，所述的重组菌株S.pactum SCSIO 02999/ΔtotR5i/pPWW50-totR2是将S.pactumSCSIO 02999菌株中的Totopotensamides生物合成基因簇中的负调控基因totR5进行敲除、同时将正调控基因totR2进行超表达得到；

所述的化合物R2-1的结构式如下所示：

4.重组菌株Streptomyces lividans TK64/pCSG5549/ΔtotR5i/ΔtotR3i/ΔtotP3在制备化合物P3-1和P3-2中的应用，所述的重组菌株Streptomyces lividans TK64/pCSG5549/ΔtotR5i/ΔtotR3i/ΔtotP3是将Totopotensamides生物合成基因簇导入到异源宿主S.lividans TK64中，对Totopotensamides生物合成基因簇中的负调控基因totR5和totR3进行同框缺失，再对基因簇中的P450基因totP3进行插入缺失得到；用包含totopotensamides生物合成基因簇的上下游基因orf(-1)和totR5的引物对S.pactumSCSIO 02999的BAC文库进行筛选，获得BAC 3-20G质粒，对其进行末端测序，确定所述的BAC3-20G质粒包含了整个totopotensamides生物合成基因簇，将其命名为pCSG5549，所述的BAC 3-20G质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，SEQ ID NO.1的第2972-101763位核苷酸序列是环脂肽类化合物Totopotensamides生物合成基因簇；所述的orf(-1)的引物对是orf(-1)-testF：ATGACGACGCAAGCGCAC，orf(-1)-testR：CTACCGCAGGGCCAGCAG，所述的totR5的引物对是totR5testF：GTATCCAGTTCCCGGGAC，totR5testR：GACAAGAAGACCGAGAGC；

所述的化合物P3-1和P3-2的结构式如下所示：

P3-1 R₁＝CH₃；R₂＝Cl ；R₃＝CH₃；R₄＝H；R₅＝OH；R₆＝H

P3-2 R₁＝CH₃；R₂＝Cl ；R₃＝CH₃；R₄＝H；R₅＝H；R₆＝H。