[发明专利]一种用于抗犬细小病毒病的单链抗体及其制备方法

说明书

本发明提供了用于抗犬细小病毒病的单链抗体及其制备方法，其单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所示单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示所示。本发明提供的用于抗犬细小病毒病的单链抗体可有效中和犬细小病毒，可用于预防犬细小病毒病药物的制备。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于抗犬细小病毒病的单链抗体及其制备方法。

背景技术

犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)是犬科动物最常见的、危害最严重的病毒病性感染源之一，是食肉动物细小病毒的典型代表，患病犬难以治愈。CPV是主要引起犬科动物感染严重肠炎和心肌炎综合征的烈性传染病，尤其是2-4月龄的幼犬危害最大，发病率和致死率达到70％，对犬类的健康造成了极大的危害，给养犬业带来了重大的损失。临床上对患病犬进行治疗的总原则为消炎、补液、止血、止呕、抗病毒，治疗方法是给予发病早期犬注射抗CPV血清或抗CPV单克隆抗体，同时辅助输液、输血、静脉注射犬免疫球蛋白或血白蛋白等其它疗法以提高疗效。

到目前为止，抗体在疾病的诊断、治疗和预防中发挥着重要的作用。截至2015年底，欧美市场已有超过50种治疗性抗体上市销售，同时还有300多种抗体药物进入了临床试验阶段。从研究趋势看，抗体药物的成功率大于20％，远远超过传统化学小分子药物的11％，因此抗体药物必将成为未来制药行业发展的主要方向。由于多克隆抗体(抗血清)和单克隆抗体因其自身不足越来越不适合临床实践了。因此，应用现代子生物学技术和蛋白质工程技术，建立一些治疗性的基因工程抗体将成为防控疫病的大势所趋。

单链抗体(single chain variable fragment,scFv)是基因工程抗体的一种，由于具备亲本抗体可与抗原特异性结合的特征，同时具有其分子量小、组织穿透性强、免疫源性低、血液清除快、可经济方便地生产、易于基因工程改造(或被重新构建成多价分子，或与其它分子相融合)等特点，显示出比完整长度的单克隆抗体更大的优势，因此将在畜禽疾病的临床治疗中拥有很好的应用前景。在国内外已报道的几十种抗体片段分子中，单链抗体占35％，是目前研究较多的重组抗体之一。迄今，国内外已有十几种用于防治动物疫病的单链抗体研制成功。但是选择何种犬细小病毒的抗原进行制备单链抗体的制备，如何进一步用于治疗犬细小病毒病的单链抗体还未发现。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种用于抗犬细小病毒病的单链抗体及其制备方法。

为实现上述目的，本发明采用以下的技术方案为：

一种用于抗犬细小病毒病的单链抗体，所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

一种编码如上所述用于抗犬细小病毒病的单链抗体的DNA分子，其轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述单链抗体的重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

一种编码用于抗犬细小病毒病的单链抗体的DNA分子，其特征在于，所述DNA分子的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。

一种表达用于抗犬细小病毒病的单链抗体的载体，其特征在于，其含有如上所述编码如权利要求2所述的用于抗犬细小病毒病的单链抗体的DNA分子序列。

一种用于抗犬细小病毒病的单链抗体的制备方法，其包括如下步骤：

(1)、构建含有抗犬细小病毒病的单链抗体的全场基因序列的原核表达载体pET-32a(+)-scFv质粒；

(2)、原核表达载体pET-32a(+)-scFv质粒转入表达菌；

(3)、将表达菌加入含IPTG的LB液体培养基进行诱导表达蛋白；

(4)、将步骤(3)的菌液在37℃，振荡培养过夜，