[发明专利]一种诱导骨髓来源树突状细胞稳定分化为成熟树突状细胞的培养方法

说明书

本发明公开了一种诱导骨髓来源树突状细胞稳定分化为成熟树突状细胞的培养方法。该方法利用第一诱导剂GM‑CSF和IL‑4、第二诱导剂可德兰共同对未成熟树突状细胞进行诱导分化，能显著刺激树突状细胞成熟，提高树突状细胞的成熟率，进而提高树突状细胞的抗原提呈性，刺激T细胞的活性，高效活化T细胞。该方法操作简单、方便。应用前景好。

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域。更具体地，涉及一种诱导骨髓来源细胞稳定分化为成熟树突状细胞的培养方法。

背景技术

树突状细胞(dendritic cells,DCs)是主要的抗原提呈细胞(antigenpresenting cell,APC)，其能够直接激活初始T细胞诱导适应性免疫应答，是先天性免疫和适应性免疫反应的重要介质，在诱导免疫耐受维持机体稳态、抗肿瘤免疫反应方面均发挥着重要作用。DCs起源于骨髓髓样干细胞和淋巴样干细胞，以未成熟(immature dendriticcells,imDCs)的状态分布于各个组织器官，imDCs经过抗原摄取、炎症因子活化等一系列过程，进而转变为更有利于抗原递呈的成熟DC(mature dendritic cells,mDCs)。mDCs将抗原呈递给CD4+的Th细胞,激活T细胞、B细胞、巨噬细胞和细胞毒性T细胞(CTL)，进行特异性的免疫应答。mDCs丧失了抗原摄取能力，高表达MHCⅡ、CD83、CD86等共刺激分子和黏附分子，具有较强的抗原提呈能力。在免疫反应中，Th1在增强吞噬细胞介导的抗感染免疫，抗肿瘤免疫中发挥重要作用；而Th2则被认为起负向调节作用。在这一过程中，DCs分泌的IL-12起重要作用，因此，能分泌高水平的IL-12是DCs生物活性高的标志之一。因此，mDCs在诱导机体免疫应答中具有重要地位。

目前，杨波等提出了一种改良树突状细胞的体外诱导和成熟调控方法(医学信息，2010年)，将外周血单个核细胞利用IL-4与GM-CSF共同诱导培养6天后成熟2～3天即可。

然而现有的DCs培养技术仍然难以获取足量的mDCs、培养效率低、成熟度不够、表面标记表达低、免疫功能差，很大程度上限制了后续实验的准确性和可靠性。因此，有必要对现有mDCs培养方案进行进一步完善，以稳定高效地获取大量的mDCs。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对现有成熟树突状细胞(mDCs)培养技术的缺陷和不足，提供一种促进树突状细胞成熟的培养方法，利用可德兰配合GM-CSF和IL-4对未成熟树突状细胞进行诱导分化，能显著刺激树突状细胞成熟，高效活化T细胞。

本发明的目的是提供一种促进树突状细胞成熟的培养方法。

本发明另一目的是提供所述方法培养获得的成熟树突状细胞。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

本发明首先提供可德兰在诱导未成熟树突状细胞分化为成熟树突状前体细胞中的应用，以及可德兰、GM-CSF和IL-4三者联用在诱导培养成熟树突状前体细胞中的应用。

本发明进一步提供一种含有可德兰的可促进树突状细胞成熟的诱导剂。

优选地，所述诱导剂还含有GM-CSF和IL-4。

优选地，所述诱导剂中，以质量比计，可德兰：GM-CSF：IL-4＝(500-1500)：(1-4)：(1-4)。

更优选地，以质量比计，可德兰：GM-CSF：IL-4＝(500-1500)：(2-4)：(1-2)。

最优选地，以质量比计，可德兰：GM-CSF：IL-4＝500：2：1。

另外，本发明提供一种促进树突状细胞成熟的培养方法：取经诱导分化的未成熟树突状细胞，利用第一诱导剂和第二诱导剂共同诱导分化为成熟树突状前体细胞；所述第一诱导剂包括GM-CSF和IL-4；所述第二诱导剂包括可德兰。