[发明专利]一种L-2-氨基丁酰胺的制备方法

权利要求书

1.一种L-2-氨基丁酰胺的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

以L-苏氨酸为原料，利用苏氨酸脱氨酶将L-苏氨酸转化为2-丁酮酸；

利用氨基酸脱氢酶将2-丁酮酸转化为L-2-氨基丁酸；

在酰胺酶的催化作用下，将L-2-氨基丁酸反应成L-2-氨基丁酰胺；

所述L-2-氨基丁酰胺制备方法的步骤具体包括：

将含有重组载体的大肠杆菌菌株接种于种子培养基中进行振荡培养，得到种子液；所述的重组载体包含苏氨酸脱氨酶的编码基因、氨基酸脱氢酶的编码基因以及酰胺酶的编码基因；所述氨基酸脱氢酶的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示；所述苏氨酸脱氨酶的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:4所示；所述酰胺酶的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:6所示；

将上述种子液接种于含有L-苏氨酸的发酵培养基中，得到发酵液；

将上述发酵液的pH值控制在6.5~7.5，同时对发酵液进行搅拌发酵，当发酵液的OD600为10~15时，往发酵液中加入诱导剂诱导苏氨酸脱氨酶、氨基酸脱氢酶和酰胺酶表达，并继续进行搅拌发酵，得到L-2-氨基丁酰胺；

每升所述含有L-苏氨酸的发酵培养基中包括以下组分：L-苏氨酸60~80g、酵母粉4~6g、胰蛋白胨1~3g、(NH₄)₂SO₄ 1~3g、K₂HPO₄ 3~5g、KH₂PO₄ 3~5g、MgSO₄ 0.3~1g、一水合柠檬酸0.1~0.5g、MnCl₂ 0.05~0.1g；

所述的诱导剂为异丙基-β-D-硫代半乳糖苷。

2. 根据权利要求1所述的一种L-2-氨基丁酰胺的制备方法，其特征在于，每升所述的种子培养基中包括以下组分：酵母粉4~6g、蛋白胨8~12g、NaCl 4~6g、MgSO₄ 0.5~1.5g。

3.根据权利要求1所述的一种L-2-氨基丁酰胺的制备方法，其特征在于，所述含有L-苏氨酸的发酵培养基与种子液的体积比为100:(3~5)。

4.根据权利要求1所述的一种L-2-氨基丁酰胺的制备方法，其特征在于，所述的步骤还包括：

当发酵液中L-苏氨酸的质量浓度低于10~15g/L时，按照每升发酵液补加20~40g的量往发酵液中补加L-苏氨酸，并重复该步骤3~5次。

5.根据权利要求1所述的一种L-2-氨基丁酰胺的制备方法，其特征在于，每升所述的发酵液中添加的诱导剂的质量为1~3g。

6.根据权利要求1所述的一种L-2-氨基丁酰胺的制备方法，其特征在于，所述的步骤中，振荡培养的温度为32~37℃。

7.根据权利要求1所述的一种L-2-氨基丁酰胺的制备方法，其特征在于，所述的步骤中，搅拌发酵的温度为32~37℃。