[发明专利]重组人生长激素的组合物和其制备方法

说明书

本发明公开了一种重组人生长激素的组合物和其制备方法。本发明的组合物包括重组人生长激素、组氨酸、甘露醇、泊洛沙姆、苯酚和二糖。本发明提供的重组人生长激素的组合物明显降低了脱酰胺反应、氧化以及高分子聚集。

技术领域

本发明涉及一种重组人生长激素的组合物及其制备方法。具体而言，本发明涉及包括重组人生长激素、组氨酸、甘露醇、泊洛沙姆、苯酚和二糖的重组人生长激素的组合物、其制备方法和用途。

背景技术

人生长激素(hGH)是一种由垂体前叶促生长细胞产生和分泌的蛋白激素。人生长激素通过对蛋白质、碳水化合物和脂肪的代谢作用，在儿童身体生长和成人的代谢中起着关键作用。

人生长激素为由191个氨基酸组成的单链多肽(Bewly等，1972)，具有两个二硫键。一个在Cys-53和Cys-165之间，在分子内形成大环。另一个在Cys-182和Cys-189 之间，在C端附近形成小环。

在溶液中，hGH主要以单体形式存在，含小部分二聚体或更高分子量的寡聚体。在某些条件下，可诱发hGH形成大量的二聚体、三聚体或更高的寡聚体。人生长激素聚体的形成会引起免疫原性增强，进而在体内导致安全问题。

在合适的条件下，蛋白质中的天冬酰胺和谷氨酰胺残基易发生脱酰胺反应。已有文献报道，hGH发生这种反应，导致Asn-152转变为天冬氨酸，Gln-137转变为谷氨酸(Lewis等，1981)。已知在某些贮存条件下，生物合成的hGH可发生降解，导致另一个天冬酰胺(Asn-149)发生脱酰胺反应。Asn-152、Gln-137以及Asn-149为发生脱酰胺反应的主要位点。尽管研究表明，hGH脱酰胺化产物没有毒性，也不改变其与受体的结合能力及生物活性，但作为药品来说，脱酰胺仍然是不希望看到，且需要得到控制(Cleland等，1993；Jenkins等，2008)。

蛋白质中的甲硫氨酸残基易于氧化，形成硫氧化物。hGH中的Met-14和Met-125 可发生磺化氧化反应(Becker等，1988)。Met-14和Met-125为hGH中主要的氧化位点。与天然hGH相比较，Met-14和Met-125氧化产生的亚砜结构降低了hGH的稳定性。

hGH的液体制剂有不稳定倾向，易发生的化学反应如：脱酰胺反应或氧化，同时由于物理上的不稳定也易形成二聚体或等高分子量的聚集体(Becker等，1988； Becker等，1989；Cleland等，1993；Ablinger等，2012)。

重组人生长激素(rhGH)具有与内源性人生长激素完全相同的氨基酸含量、序列和空间构象，且具有相同的生物活性。rhGH被批准用于治疗儿童和成人生长激素缺乏，特纳氏综合征、隐睾-侏儒-肥胖-低智综合征、儿童肾病等。

由于重组人生长激素在溶液中不稳定，rhGH药物制剂通常被冷冻干燥并且以冷冻干燥形式存储在2至8℃下，其在使用前必须重新溶解。为了改善医生与患者使用的便利性，提高rhGH的稳定性，本领域对rhGH的液体制剂也进行了很多研究。

国际专利公开号WO94/03198公开了一种稳定的液态配方，该配方包含人生长激素、缓冲液、非离子表面活性剂和中性盐、甘露醇或防腐剂。缓冲液可为组氨酸，也可优选柠檬酸。该申请公开了一种优选配方，包含作为缓冲液的柠檬酸和氯化钠和用来稳定的聚山梨酯20。这种组合防止了蛋白聚合，但也产生相当数量的脱酰胺的生长激素。

国际专利公开号WO93/19776公开了含生长激素的蛋白溶液配方，该配方包含柠檬酸作为缓冲液，相比包含磷酸缓冲液的配方更稳定。该配方包含氨基酸，比如甘氨酸和丙氨酸和/或甘露醇或其他糖乙醇和/或甘油和/或其他碳水化合物和选择性的防腐剂如苯乙醇。

国际专利公开号WO2005/105148公开了液体生长激素制剂，该制剂包含柠檬酸或磷酸盐作为缓冲液，以及聚乙二醇-聚丙二醇和碱金属盐或伪碱土金属盐。