[发明专利]一种高产雄烯二酮的重组分枝杆菌及构建方法及应用有效
| 申请号： | 202010140954.8 | 申请日： | 2020-03-03 |
| 公开（公告）号： | CN111454871B | 公开（公告）日： | 2022-06-14 |
| 发明（设计）人： | 齐崴;尤生萍;张伟;常红星;钱建武;苏荣欣 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/74;C12P33/02;C12R1/32 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 | 代理人： | 陆艺 |
| 地址： | 300350 天津市津南区海*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高产 雄烯二酮 重组 分枝杆菌 构建 方法 应用 | ||
1.一种产雄烯二酮的重组分枝杆菌，其特征是用下述方法构建：将胆固醇氧化酶基因ChoM2、携带有RBS片段的甾酮C27单加氧酶基因Smo2和携带有RBS片段的17β-羟固醇脱氢酶基因Hsd4A导入新金分枝杆菌（Mycobacterium sp.） CICC 21097中，得到产雄烯二酮的重组分枝杆菌MNCSH；
所述胆固醇氧化酶基因ChoM2的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
所述RBS片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
所述甾酮C27单加氧酶基因Smo2的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；
所述17β-羟固醇脱氢酶基因Hsd4A的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；
所述产雄烯二酮的重组分枝杆菌的构建方法，包括如下步骤：将胆固醇氧化酶基因ChoM2和质粒pMV261通过酶切，连接，构建单基因过表达重组质粒pMV261-ChoM2；将携带有RBS片段的甾酮C27单加氧酶基因Smo2和重组质粒pMV261-ChoM2通过酶切，连接，构建双基因过表达重组质粒pMV261-ChoM2-Smo2；将携带有RBS片段的17β-羟固醇脱氢酶基因Hsd4A和双基因过表达重组质粒pMV261-ChoM2-Smo2通过酶切，连接，构建三基因过表达重组质粒pMv261-ChoM2-Smo2-Hsd4A；
将三基因过表达重组质粒pMV261-ChoM2-Smo2-Hsd4A导入新金分枝杆菌感受态细胞中，获得的阳性转化子即为一种产雄烯二酮的重组分枝杆菌，命名为MNCSH。
2.根据权利要求1所述一种产雄烯二酮的重组分枝杆菌，其特征是所述的三基因过表达重组质粒pMV261-ChoM2-Smo2-Hsd4A中三个基因ChoM2、携带有RBS片段的甾酮C27单加氧酶基因Smo2和携带有RBS片段的17β-羟固醇脱氢酶基因Hsd4A的构建先后顺序互换。
3.权利要求1或2所述重组分枝杆菌在发酵生产雄烯二酮中的应用。
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