[发明专利]一种对绒毛组织中Siglecs家族的检测方法及其试剂盒和应用

说明书

本发明公开了一种对绒毛组织中Siglecs家族的检测方法及其试剂盒和应用，提供绒毛组织Siglecs家族中的Siglec1‑3、Siglec5‑12、Siglec14‑15制备特异性引物，将该特异性引物包被于细胞培养板上，将待测样品与反应液混合后，加入包被后的细胞培养板中进行PCR定量检测以及使用该检测方法进行的试剂盒，可用于测定绒毛组织中Siglecs家族的核酸水平，不适用于不明原因反复自然流产中的应用，特别是因胚胎植入能力受到影响，而导致的胚胎黏附能力失败等造成的不明原因反复自然流产的检测。

技术领域

本发明是一种对绒毛组织中Siglecs家族的检测方法及其试剂盒和应用，具体涉及对绒毛组织中Siglecs家族核酸水平的检测方法及其使用到的引物和试剂盒，以及该检测方法在预测反复性不明原因流产中的应用，属于医学和生物技术领域。

背景技术

反复性自然流产（Recurrent spontaneous abortion，RSA）是指临床上连续2次或2次以上的自然流产，是一种常见的妊娠并发症，其发病率为0.4～0.8%，其中，40～80%的RSA原因不明，称为不明原因反复自然流产（Unexplained recurrent spontaneousabortion，URSA）。

当前研究发现，URSA的病因复杂多样，包括母体因素（如子宫内膜容受性、免疫性抗体异常）和胚胎因素（如染色体异常）。然而，目前临床上仅能对其中部分因素进行排查，通过抽取血液检测免疫性不孕七项以判断母体免疫学因素，通过高通量测序或基因芯片都清宫术后胚胎组织进行染色体异常的鉴定。例如：

徐静等在“HIF-1α、VEGF在不明原因反复自然流产患者绒毛组织中的表达及与MVD的关系”，《陕西医学杂志》，2007年12月第36卷第12期，1620-1622,1627的研究中发现，HIF-1α（缺氧诱导因子-1α）、VEGF（血管内皮生长因子）的表达均与MVD（微血管密度）呈正相关，其结果表明：HIF-1α在不明原因反复自然流产患者绒毛组织表达水平下降，通过调节VEGF（血管内皮生长因子）基因的转录，进而影响滋养细胞的浸润和胎盘血管重铸，可能参与了不明原因反复自然流产的发生。

白慧玲等在“绒毛中TRAIL及其受体的表达与不明原因反复自然流产的相关性的探讨”，《免疫学杂质》，2010年1月第26卷第1期，53-54中提到：在取不明原因反复流产患者绒毛组织进行免疫组化法检测TRAIL及其受体的表达时发现，绒毛组织中TRAIL及其受体DR4、DR5蛋白表达较强，而诱骗受体DcR1及DcR2蛋白与正常对照相比表达较少，P值均小于0.05，该结果表明，TRAIL及其受体可能是造成自然流产的机制之一。

现有研究发现，由于胚胎因素（如胚胎植入能力不足）导致的不明原因流产更为复杂，因此，在不明原因反复流产病因检测过程中，目前暂未出现判断胚胎植入能力的检测方式。

发明内容

本发明的目的在于提供一种对绒毛组织中Siglecs家族的检测方法及其对应的试剂盒，提供了对绒毛组织中Siglecs家族Siglec1-3、Siglec5-12、Siglec13-15基因序列进行的PCR检测，用于测定绒毛组织中Siglecs家族的核酸水平。

本发明的另一目的在于提供一种对绒毛组织中Siglecs家族的检测和试剂盒不明原因反复自然流产中的应用，特别是因胚胎植入能力受到影响，而导致的胚胎黏附能力失败等造成的不明原因反复自然流产的检测。

本发明通过下述技术方案实现：一种对绒毛组织中Siglecs家族的检测方法，提供绒毛组织Siglecs家族中的Siglec1-3、Siglec5-12、Siglec14-15制备特异性引物，将该特异性引物包被于细胞培养板上，将待测样品与反应液混合后，加入包被后的细胞培养板中进行PCR定量检测。

所述特异性引物包括：