[发明专利]一种高效抗敏止痒的桃胶多糖及其发酵提取方法和应用

说明书

本发明公开了一种高效抗敏止痒的桃胶多糖的发酵提取方法，包括：步骤一、将浸泡后的桃胶、超纯水和可表达半乳聚糖酶的酵母菌干粉按1:5～100:0.01～0.1的比例混合，搅拌发酵；步骤二、当发酵液的粘稠度降低到200～1000mPa.s时，停止搅拌，倒出发酵液，加入无水乙醇至乙醇的质量分数为60％～90％，静置，去上清；步骤三、采用乙醇洗涤下层沉淀，减压抽滤后冷冻干燥，获得桃胶多糖。本发明还公开了一种高效抗敏止痒的桃胶多糖以及所述的桃胶多糖的应用及在制备抗敏止痒的护肤品中的应用。本发明的桃胶多糖的发酵提取方法，其能耗低、环保。采用本发明的方法获得的桃胶多糖，具有抗敏止痒的效果。

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体地说，是关于一种高效抗敏止痒的桃胶多糖及其发酵提取方法和应用。

背景技术

桃胶具有多种药用价值，在医药和美容方面的主要作用是降血脂、降血糖、皮肤保湿等功效。桃胶的分子量大、结构高度交联，溶解困难。可溶性桃胶多糖的制备通常可以用水浸胀水解提取法，以及改进的醇提、高压等几种方法，尽管改善了桃胶多糖的溶解性，分子量大大降低，但是产物的均一性较差、产物分子量分布较宽，皮肤屏障或肠道粘膜系统对桃胶多糖吸收有一定的阻碍和屏障作用，生物利用率较低。因此，有必要研究一种更有利于桃胶多糖被生物体有效利用的方法，以促进桃胶在医药或美容护肤方面的应用。鉴于生物体内多糖多是糖单元的聚合物而成，将多糖通过特定方法裂解为寡糖，可有效降低产物的分子量，便于生物体的吸收，也有望提升产物的生物活性。近年来，微生物产酶裂解桃胶多糖的研究有所发展，国外的研究从以溶解的桃胶多糖为碳源的黄曲霉培养物中分别分离出了黄曲霉胞内和胞外分泌的可以水解桃胶多糖的粗酶，国内有研究从卡拉胶裂解的菌株中筛选高表达半乳聚糖酶的菌株用于桃胶裂解和多糖的提取。

然而，高活性、高稳定性的半乳聚糖酶菌株的筛选和保存是一项具有挑战性的工作。天然菌株的表达量随着繁殖代数的增加会引起活性和稳定性下降。天然菌株需要特定的培养基条件，因此在发酵过程中引入的成分和产生的代谢产物不可避免引入新的杂质，增加后期多糖纯化的难度，以及对产品的使用带来不可控的风险。

发明内容

为了解决上述问题，本发明利用酵母工程菌，通过DNA重组技术引入半乳聚糖酶基因序列，以粗提取的桃胶多糖作为营养培养液，以糖类成分作为碳源，微量植物蛋白作为氮源，维持酵母菌生长，让酵母菌产生半乳聚糖酶，形成分泌在细胞壁外侧的胞外蛋白，但不释放进入到培养液中。从而定向酶解交联的桃胶多糖，释放分子量更小的多糖单体，从而提高多糖的生物利用率。因此，本发明的第一个目的是提供一种高效抗敏止痒的桃胶多糖的发酵提取方法，以解决现有的桃胶多糖的提取方法均一性差、产物分子量分布较宽的问题。本发明的第二个目的是提供一种采用上述的发酵提取方法获得的高效抗敏止痒的桃胶多糖。本发明的第三个目的是提供一种所述的高效抗敏止痒的桃胶多糖的应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

作为本发明的第一个方面，一种高效抗敏止痒的桃胶多糖的发酵提取方法，包括如下步骤：

步骤一、将浸泡后的桃胶、超纯水和表达半乳聚糖酶的酵母菌干粉按1:5～100:0.01～0.1的比例混合，然后倒入发酵罐中恒温、恒速搅拌发酵；

步骤二、当发酵液的粘稠度降低到200～1000mPa.s时，停止搅拌，倒出发酵液，加入无水乙醇至乙醇的质量分数为60％～90％，静置，去上清；

步骤三、采用乙醇洗涤下层沉淀，减压抽滤后冷冻干燥，获得桃胶多糖。

根据本发明，步骤一的桃胶、超纯水和表达半乳聚糖酶的酵母菌干粉的比例为1:10:0.01。

较佳的，步骤二加入无水乙醇至乙醇的质量分数为70％时，静置。

根据本发明，步骤一的可表达半乳聚糖酶的酵母菌干粉的制备方法包括如下步骤：