[发明专利]氟吡甲禾灵半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了氟吡甲禾灵半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用，本发明提供的氟吡甲禾灵半抗原既最大程度保留了氟吡甲禾灵的特征结构，使得氟吡甲禾灵半抗原的免疫原性明显增强，又具有可以与载体蛋白发生偶联的羧基；用氟吡甲禾灵半抗原与载体蛋白偶联后得到的氟吡甲禾灵人工抗原去免疫动物，更有利于刺激动物免疫应答产生特异性更强、灵敏度更高的抗体，经检测氟吡甲禾灵抗体的灵敏度可达0.1μg/L，与其他芳氧苯氧丙酸酯类除草剂的交叉反应率低，为后续建立氟吡甲禾灵的各种免疫分析方法提供了基础。

技术领域

本发明属于食品安全检测领域。更具体地，本发明涉及氟吡甲禾灵半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用。

背景技术

氟吡甲禾灵(haloxyfop-methyl)是一种芳氧苯氧丙酸类除草剂，具有杀草快、内吸作用强及对作物高度安全等特点，广泛用于阔叶作物田中禾本科杂草的防除，如大豆、花生、油菜、棉花、油葵、马铃薯和蔬菜等。但其药效稳定，不易分解，加上使用不当，很容易造成作物及后续加工产品中残留量超标，从而可能危害人体健康。我国国家标准GB 2763-2019《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》中规定了不同食品中氟吡甲禾灵的残留限量。

目前，国内外检测氟吡甲禾灵主要采用气相色谱法、气相色谱-质谱法和液相色谱串联质谱法等分析方法，存在样品前处理繁琐、检测时间长、仪器贵重等缺点，所以在我国无法得到广泛应用，并且不符合现场检测“在短时间内低成本对大量样品进行准确检测和筛选”的要求。而免疫学检测分析技术以其高灵敏、特异性高、快速、操作简便等优点在药物残留检测领域已被广泛应用，比起仪器等检验方法有很多优势。所以免疫分析为氟吡甲禾灵残留研究提供了一条新的分析检测方法。

在建立免疫学检测方法并应用该检测方法检测氟吡甲禾灵残留量时，关键技术在于能够获取到特异性强、灵敏度高的抗体，而要实现这一目标，前提条件就是得合成、制备出合适的氟吡甲禾灵半抗原。

发明内容

针对现有技术中存在的不足之处，本发明提供一种能最大程度保留氟吡甲禾灵的特征结构，又具有一定长度连接臂的半抗原以及这种半抗原的制备方法；以此半抗原制备的人工抗原、检测灵敏度高和特异性强的抗体；以及此半抗原的应用。

为了实现本发明的目的，第一方面，本发明提供一种氟吡甲禾灵半抗原，其具有如下结构式：

本发明提供的氟吡甲禾灵半抗原在氟吡甲禾灵的苯环上引入羧基活性基团，从而可以与载体蛋白进行偶联得到人工抗原用于免疫；该氟吡甲禾灵半抗原保留了氟吡甲禾灵的所有特征基团，最小改变氟吡甲禾灵原有结构特征，同时与载体蛋白偶联后，突出的是氟吡甲禾灵本身独有的杂环部分的结构，为后续刺激动物免疫应答产生特异性更强、灵敏度更高的抗体奠定基础。

第二方面，本发明提供上述氟吡甲禾灵半抗原的制备方法，其包括如下步骤：

1)在碱性条件下，使2-(4-羟基苯氧基)丙酸甲酯与[2-氯-5-(三氟甲基)吡啶]甲醇发生反应，得到中间体1，所述中间体1具有结构式

2)将所述中间体1与琥珀酸酐发生反应，得到氟吡甲禾灵半抗原。

进一步地，上述步骤1)中，所述碱性条件由氢化钠提供，所述2-(4-羟基苯氧基)丙酸甲酯、[2-氯-5-(三氟甲基)吡啶]甲醇、氢化钠的物质的量之比为1:1.1:2；

所述反应在溶剂中进行，所述溶剂为二甲基亚砜；

所述反应条件为：油浴加热80℃反应6h；

所述步骤1)反应结束后，还包括对反应体系进行后处理的步骤，具体如下：将反应体系冷却到室温，加入水，加乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，蒸干，用乙腈和正己烷体积比为1:10的混合溶剂重结晶获得中间体1。