[发明专利]一种长效缓释的聚乙二醇修饰抗肿瘤药物及其制备方法

说明书

本发明公开了一种长效缓释的聚乙二醇修饰抗肿瘤药物及其制备方法，包括用以定点修饰抗肿瘤蛋白的邻苯二酚结构官能化聚乙二醇，其制备方法包括以下步骤：S1.制备邻苯二酚结构官能化聚乙二醇；S2.用所述邻苯二酚结构官能化聚乙二醇定点修饰抗肿瘤蛋白；S3.纯化，分离，用于提高PEG化蛋白质药物的缓释效果，长时间维持稳定的血药浓度。

技术领域

本发明属于药物领域，具体涉及一种长效缓释的聚乙二醇修饰抗肿瘤药物及其制备方法。

背景技术

随着生物技术的发展，蛋白类生物药物因其高活性、强特异性、生物功能明确、低毒性等优势正越来越广泛地被开发和应用。然而，诸如半衰期短、稳定性差、水溶性差、存在免疫原性、肾清除速率快等问题却限制了其进一步发展。为了解决这些问题，研究者们进行了多方面的尝试，蛋白药物的聚乙二醇修饰是其中最重要的化学修饰技术之一。聚乙二醇修饰又称PEG化，是将聚乙二醇聚合物连接到一些生物分子（比如肽，蛋白质和抗体片段）上的过程，旨在改善上述蛋白药物的问题，为此诞生了一系列聚乙二醇衍生物。

PEG对蛋白抗肿瘤药物的修饰可有效降低蛋白药物的免疫原性，改变药物的半衰期，可控释放的PEG衍生物实质是在PEG与目标分子之间引入可降解的化学键，使得修饰后产物在进入人体内后可在一定条件下降解（如酶解、水解等），释放蛋白药物，维持蛋白药物的活性，延长半衰期，即提高缓释率。

现有技术的PEG化蛋白质药物多为对蛋白分子表面游离氨基进行随机非定点修饰的产品，如申请号为CN201310154747.8的“一种聚乙二醇修饰的蛋白质药物的修饰位点的测定方法”，测定了聚乙二醇修饰蛋白不同位点的效果，虽然聚乙二醇成功修饰了蛋白药物且不改变其活性，但其半衰期延长效果不佳，一方面是由于以蛋白质的氨基与PEG之间的化学键较弱，易于在短时间内降解；另一方面是由于蛋白表面的氨酸残基较多，可修饰位点过多，导致修饰产物不均一，修饰率不高，部分未修饰的蛋白质药物直接进行机体内作用，降低了具备缓释效果的药物的浓度，为维持血药浓度，需频繁服用。

因此，研制新型的PEG定点修饰的药物蛋白，对延长其缓释作用十分必要。

发明内容

本发明提供一种长效缓释的聚乙二醇修饰抗肿瘤药物及其制备方法，提高PEG化蛋白质药物的缓释效果，长时间维持稳定的血药浓度。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是，一种长效缓释的聚乙二醇修饰抗肿瘤药物，包括用以定点修饰抗肿瘤蛋白的邻苯二酚结构官能化聚乙二醇，蛋白表面的反应性基团多呈亲核性，亲核活性从大到小为：巯基＞α－氨基＞ε－氨基＞羧基＞羟基，因此，巯基为药物蛋白的最佳反应位点，通过对聚乙二醇进行改性，使得改性后的聚乙二醇能与蛋白质的巯基加成反应，键能强，降解条件高时间长，降解速率慢，缓释效果好。

优选地，所述聚乙二醇的分子量为5kDa-20kDa，若聚乙二醇分子量太大，由于聚乙二醇链长增长空间位阻增大，会遮蔽蛋白表面的一些基团，则修饰后的蛋白药物水解活力会下降，若聚乙二醇分子量太小，则起不到降低蛋白免疫原性的作用；

优选地，所述抗肿瘤蛋白含有半胱氨酸，半胱氨酸的存在可避免邻苯二酚结构官能化聚乙二醇直接作用于蛋白质的二硫键，从而影响蛋白质的三级结构，对于本身含有半胱氨酸的蛋白药物可将半胱氨酸直接作为靶点与邻苯二酚结构官能化聚乙二醇进行作用，若不含半胱氨酸的蛋白药物则可通过基因工程手段改造出游离半胱氨酸，基因工程改造一些不影响蛋白质活性的氨基酸定点突变为半胱氨酸的研究较为成熟，因此在本方案中不进行赘述。

进一步地，还提供一种长效缓释的聚乙二醇修饰抗肿瘤药物的制备方法，包括以下步骤：

S1.制备邻苯二酚结构官能化聚乙二醇；

S2.用所述邻苯二酚结构官能化聚乙二醇定点修饰抗肿瘤蛋白；

S3.纯化，分离。