[发明专利]一种干式同型半胱氨酸测试卡及其应用

说明书

一种干式同型半胱氨酸测试卡及其应用,包括解离液R1和干化学试纸，所述解离液R1包括还原剂、丝氨酸和缓冲液；所述干化学试纸包括支持层、层析膜、酶垫、滤血层、酶循环反应层、扩散层和塑料片；所述的层析膜、酶垫、滤血层、酶循环反应层和扩散层依次从下至上叠合在支持层上，所述的层析膜的长度大于酶垫、滤血层、酶循环反应层和扩散层的长度，层析膜固定于靠近支持层的一端、并向着支持层的另一端延伸；所述的支持层上远离酶垫的一端附近设置有塑料片，所述的塑料片上设置有显色区，塑料片位于层析膜的上方并与之平行设置，且显色区遮盖层析膜的部分区域。具有可检测人体血液中全部同型半胱氨酸、敏感性强的优点。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体地说涉及一种干式同型半胱氨酸测试卡及其应用。

背景技术

同型半胱氨酸(HCY)是血液中的一种含硫分子的氨基酸，由蛋氨酸转化而成。在体内经蛋氨酸脱甲基化生成，主要通过再甲基化和转硫途径代谢。需蛋氨酸合成酶、胱硫醚β合成酶(CBS)及维生素B12、叶酸、维生素B6参与。酶功能障碍或维生素的缺乏等均可导致同型半胱氨酸升高。正常情况下HCY会迅速转化成谷胱甘肽和S-腺苷蛋氨酸。这是生物体内非常重要的两种物质，与肝脏解毒、体内垃圾——自由基的清除、修复DNA有着密切的关系。HCY的升高，就意味着这两种物质的缺乏，将会给健康带来极大的损害。因此，同型半胱氨酸是我们健康的风向标。

目前检测同型半胱氨酸的方法有很多，包括高效液相色谱法、酶联免疫吸附法、化学发光法、循环酶法。这些方法中或需要借助价格昂贵的大型仪器检测如高效液相色谱法、化学发光法、循环酶法，或操作复杂繁琐如酶联免疫吸附法，以上方法均不能满足基层医院检验场所对检测方法的快速便捷的需求。

中国国家知识产权局网站上也公开了一些适合现场快速检测的同型半胱氨酸检测方法。其中中国国家知识产权局网站上公开了一种定量测定同型半胱氨酸的电化学试纸及其制备方法(公开号CN104931549A)；中国国家知识产权局网站上还公开了一种同型半胱氨酸干化学法检测试纸条及其制备方法(公开号CN101592656A)。以上两种方法操作方便、结构简单，但存在一个重大缺陷即同型半胱氨酸在血液中大部分通过二硫键与蛋白结合形成氧化型同型半胱氨酸，而上述申请文件中均未使用还原剂对氧化型同型半胱氨酸进行还原，因而它们只能检测血液样本中游离的还原型同型半胱氨酸的含量，其临床敏感性较差。

发明内容

本发明针对现有技术的上述不足，提供一种可检测人体血液中全部同型半胱氨酸、敏感性强的干式同型半胱氨酸测试卡。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种干式同型半胱氨酸测试卡，包括解离液R1和干化学试纸，所述解离液R1包括还原剂、丝氨酸和缓冲液；所述干化学试纸包括支持层、层析膜、酶垫、滤血层、酶循环反应层、扩散层和塑料片；所述的层析膜、酶垫、滤血层、酶循环反应层和扩散层依次从下至上叠合在支持层上，所述的层析膜的长度大于酶垫、滤血层、酶循环反应层和扩散层的长度，层析膜固定于靠近支持层的一端、并向着支持层的另一端延伸；所述的支持层上远离酶垫的一端附近设置有塑料片，所述的塑料片上设置有显色区，塑料片位于层析膜的上方并与之平行设置，且显色区遮盖层析膜的部分区域。

采用上述结构，本发明的反应原理为：样本中氧化型的同型半胱氨酸(HCY)被R1中的还原剂还原为游离HCY，当还原后样本加入到酶循环反应层时，在酶循循环层中，游离HCY在胱硫醚-β-合成酶作用下和丝氨酸反应生成L-胱硫醚，后者在胱硫醚--β-裂解酶作用下生成HCY、丙酮酸和氨，HCY会促使上述反应往复循环下去；酶循环反应层产生的丙酮酸随着液体的下渗流到酶垫，在酶垫中，丙酮酸在丙酮酸氧化酶的作用下生成乙酰磷酸、过氧化氢和二氧化碳；酶垫中产生的丙酮酸流到层析膜上，此时压按塑料片的显色区域，使得显色区域与层析膜接触，显色区域上携带的显色底物被液体溶解释放到层析膜上，显色底物在过氧化物酶催化下与过氧化氢发生反应产生颜色变化，通过检测显色区域的颜色变化量来定量检测HCY。