[发明专利]检测口蹄疫非结构蛋白抗体的单抗竞争化学发光试剂盒

说明书

本发明涉及检测口蹄疫非结构蛋白抗体的单抗竞争化学发光试剂盒，属于生物技术领域。所述试剂盒包括捕获3ABC抗原的化学发光板、酶标单抗（2G5‑HRP+9E2‑HRP）、血清稀释液、20×PBST洗涤液、阳性对照血清、阴性对照血清、化学发光液（A、B），其特征在于所述捕获3ABC抗原的化学发光板为白色可拆卸的聚苯乙烯96孔板，先包被3ABC多抗，并通过3ABC多抗捕获3ABC蛋白；所述酶标单抗为分别识别3A和3B蛋白的酶标单抗2G5‑HRP和9E2‑HRP的混合物。本发明所述的试剂盒敏感性高、特异性强、重复性好，仅需洗涤一次，所需检测时间短，不受动物种属限制，适用于检测猪、牛和羊等多种易感动物。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地，涉及检测口蹄疫非结构蛋白抗体的单抗竞争化学发光试剂盒。

背景技术

口蹄疫(FMD)是一种急性、热性、高度接触传染性的动物疫病，主要危害猪、牛、羊等偶蹄动物，对养殖业和畜产品贸易具有严重的影响。口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的，FMDV属于小RNA病毒科口蹄疫病毒属，编码4种结构蛋白(SPs：VP4，VP2，VP3和VP1)和8种NSPs(NSPs：L，2A，2B，2C，3A，3B，3C，3D)。我国口蹄疫防控主要采取疫苗免疫、扑杀感染和可疑动物以及血清监测的综合性防控措施来控制口蹄疫的流行，在疫苗免疫中主要依赖灭活疫苗。一般情况下，在灭活疫苗生产过程中通过一系列纯化方法来去除NSPs。因此只有感染FMDV的动物，体内才存在NSPs抗体，而免疫动物体内不存在NSPs抗体，因此利用检测NSPs抗体来区分口蹄疫感染动物与疫苗免疫动物(DIVA)。由于动物物种以及动物个体的差异，不是所有的感染动物都可以检测到每一种NSPs抗体。因此，提出了一种基于使用一个以上的NSPs的诊断方法，这对感染动物的检测更有前景。

目前区分口蹄疫免疫与感染的方法有：病毒分离实验、RT-PCR、RT-LAMP、RPA以及基于NSP的ELISA，其中最常用、最普遍的方法就是ELISA，如包被抗原的间接ELISA、利用多抗或单抗捕获抗原的阻断ELISA，但这两种方法反应时间长，并且都需洗涤两次(血清反应后和酶标抗体反应后)。

发明内容

针对目前检测口蹄疫NSPs所面临的问题，本发明的目的在于提供检测口蹄疫非结构蛋白抗体的单抗竞争化学发光试剂盒，所述试剂盒不受动物种属的限制，可以检测猪、牛、羊等易感动物；检测时间短，灵敏度高。

为了实现上述目的，本发明采用的具体方案为：

检测口蹄疫非结构蛋白抗体的单抗竞争化学发光检测试剂盒，包括捕获3ABC抗原的化学发光板、酶标单抗、血清稀释液、20×PBST洗涤液、阳性对照血清、阴性对照血清和化学发光液；

所述捕获3ABC抗原的化学发光板是将化学发光板先用3ABC多抗包被，然后加入3ABC蛋白，通过3ABC多抗将3ABC蛋白捕获；

所述酶标单抗为2G5-HRP+9E2-HRP混合物，其中2G5为识别3A蛋白的单抗，9E2为识别3B蛋白的单抗；所述2G5和9E2识别的均为线性表位；

所述血清稀释液为含有质量分数为1％酪蛋白、体积分数为0.05％Tween-20、体积分数为0.1％proclin-300、质量分数为2％蔗糖的磷酸盐缓冲液；

所述20×PBST洗涤液为pH 7.2-7.4的浓度为0.2mol/L的磷酸盐缓冲液，其中含有体积分数为1％的Tween-20；

所述阳性对照血清是口蹄疫O/Mya98感染25天的猪血清；

所述阴性对照血清是未免疫过任何疫苗的健康猪血清；

所述化学发光液包括A液和B液，所述A液含有0.1mM的鲁米诺和0.07M发光增强剂IPP，所述B液为3mM的H₂O₂溶液；