[发明专利]人胎盘不同类型胶原蛋白选择性提取制备方法和使用

说明书

本发明所涉及的是一种人胎盘不同类型胶原蛋白的选择性提取制备方法和使用方法，使用方法是修复、增强和代替哺乳动物组织。属于医用生物材料制备和应用领域。已有的人胎盘胶原蛋白的制备方法都涉及到先利用胃蛋白酶在酸性低盐条件下消化提取，提取物中含有人胎盘中所有的各型胶原，然后利用各种方法分离不同类型的胶原。目前尚无文献资料以人胎盘为原料利用选择性酶消化直接提取胎盘各类型人胶原生产方法的报道。建立无需冗长生产过程的选择性酶消化直接分类提取人胎盘各类胶原生产方法，对于重复可控生产人胎盘胶原医用生物材料具有重要意义。

1.技术领域

本发明所涉及的是一种人胎盘不同类型胶原的选择性提取制备方法和使用方法，使用方法是修复、增强和代替哺乳动物组织。属于医用生物材料制备和应用领域。

2.背景技术

胶原是人体及动物体内含量最多的蛋白质，也是器官中结缔组织的主要成分。胶原蛋白约占人体全身蛋白总量的33％。胶原蛋白不仅是一种分布广泛的结构蛋白，而且具有多种生理功能。胶原蛋白除作为组织的支持物，赋予组织张力外，对细胞的分化、运动、化学趋向性和结缔组织的修复均起着重要的作用。多年的医学和生物学研究发现胶原蛋白是一种理想的生物材料。胶原作为一种天然蛋白质材料，已广泛应用于生物医学领域。如注射胶原蛋白用于软组织添补，止血，创伤敷料，骨科修复和血管移植涂层。近年来，基于胶原蛋白的组织工程产品已经被开发并商业化，但医疗器械行业的担忧是市场上现有的胶原生物材料都是动物组织来源的胶原蛋白，它们普遍存在异种组织排斥反应、免疫反应和抗体形成等安全隐忧，其临床应用被动物源性受到限制。为克服动物源胶原的安全性方面的隐患，已有利用基因工程的方法制备重组人胶原方面的报道。但这些重组人胶原和重组类人胶原在氨基酸序列及翻译后修饰方面和天然人胶原有显著的差别。临床安全性还有待进一步证实。

人胎盘胶原含量丰富，同时含有多种类型的胶原，如成纤维类I、III型胶原和基底膜 IV型胶原。人胎盘来源的天然人胶原的使用可以克服动物源胶原、重组人胶原和重组类人胶原的以上所述的各种风险，具有更高的安全性。

已有的人胎盘胶原的制备方法都涉及到先利用胃蛋白酶在酸性低盐条件下消化提取，提取物中含有人胎盘中所有的各型胶原，然后利用各种方法分离不同类型的胶原。刘秉慈以人胎盘为原料，经胃蛋白酶在0.5MHAC中消化提取，盐析后获取沉淀A，进一步酸性盐提取获得沉淀B，将两种沉淀以不同比例混合并加入生长激素和利多卡因后用于填充小型凹陷性皮肤缺损(中国发明专利，公告号：CN1081379)。林海以人胎盘为原料，经胃蛋白酶在0.2-0.8M HAC中消化提取，然后分级盐析，分离各类型的胶原(中国发明专利，公告号：CN103525890B)。Carl Randall Harrell以人胎盘为原料，经胃蛋白酶在0.5M HAC 中消化提取，然后分级盐析，选择性分离各类型的胶原(US Pub.No.：US 2012/0189586 A1)。Jean-Louis Tayot以人胎盘为原料，清洗后经胃蛋白酶在0.05M柠檬酸溶液中消化溶解胎盘各类型胶原，然后利用浓碱溶液中和消化组织分离IV型胶原，之后继续用胃蛋白酶消化和和分级盐析，分离I型和III型胶原(USPat.No.：5436135)。到现在为止，尚无文献资料以人胎盘为原料利用选择性酶消化直接提取胎盘各类型胶原生产方法的报道。建立无需冗长生产过程的选择性酶消化直接分类提取人胎盘各类胶原的生产方法，对于重复可控生产人胎盘胶原医用生物材料具有重要意义。

本发明描述了人胎盘不同类型胶原的选择性提取制备方法和使用方法，使用方法包括修复、增强和代替人体组织。

3.发明内容

3.1.定义

当在本文中使用时，以下术语具有下列含义：

″胶原″指本领域技术人员已知的任何胶原。