[发明专利]一种金属β-内酰胺酶活性的检测方法

权利要求书

1.一种检测金属β-内酰胺酶活性的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)标准品制备与检测：取美罗培南用生理盐水溶液系列稀释，准备并设置分光光度计，检测标准品；

2)反应体系制备：取美罗培南用生理盐水溶液溶解；

3)待测样品准备：取待测金属β-内酰胺酶样品用生理盐水溶液稀释；

4)样品检测：混合反应体系和待测样品并孵育，准备并设置分光光度计，检测样品；

5)对照品制备与检测：配制对照品，准备并设置分光光度计，检测对照品；

6)数据测定与计算：以各标准品吸光值对各标准品中美罗培南质量拟合标准曲线；将待测样品和待测样品起始对照的吸光值扣除待测样品空白对照的吸光值后代入标准曲线，计算出待测样品中美罗培南减少的质量，再计算出待测金属β-内酰胺酶样品的酶比活性；

计算公式如下：

各参数单位如下：

酶比活性单位为：活性单位每毫克，U/mg

美罗培南质量单位为：微克，μg

反应时间单位为：分钟，min

待测样品体积单位为：毫升，mL

蛋白含量单位为：毫克每毫升，mg/mL。

2.根据权利要求1所述的检测金属β-内酰胺酶活性的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)标准品制备与检测：取美罗培南用生理盐水溶液系列稀释至32～2μg/mL，准备并设置分光光度计，检测标准品；

2)反应体系制备：取美罗培南用生理盐水溶液溶解，并用生理盐水溶液稀释至300μg/mL；

3)待测样品准备：取待测金属β-内酰胺酶样品用生理盐水溶液稀释至0.02mg/mL；

4)样品检测：取4.5mL待测样品混合0.5mL反应体系，在25摄氏度恒温水浴中孵育5min后取出，准备并设置分光光度计，检测；

5)对照品制备与检测：分别配制待测样品空白对照和起始对照，准备并设置分光光度计，检测对照品；

6)数据测定与计算：以各标准品吸光值对各标准品中美罗培南质量拟合标准曲线；将待测样品和待测样品起始对照的吸光值扣除待测样品空白对照的吸光值后代入标准曲线，计算出待测样品中美罗培南减少的质量，再计算出待测金属β-内酰胺酶样品的酶比活性；

计算公式如下：

各参数单位如下：

酶比活性单位为：活性单位每毫克，U/mg

美罗培南质量单位为：微克，μg

反应时间单位为：分钟，min

待测样品体积单位为：毫升，mL

蛋白含量单位为：毫克每毫升，mg/mL。

3.根据权利要求2所述的检测金属β-内酰胺酶活性的方法，其特征在于，所述的步骤1)、4)和5)中，检测波长为300nm。