[发明专利]配子缓冲液及其制备方法

说明书

本发明涉及一种配子缓冲液及其制备方法。所述配子缓冲液包括基本缓冲液和添加物；以在所述基本缓冲液中的添加量计，所述添加物包括以下组分：褪黑素0.01～100nmol/L；辅酶Q10 0.5～2.0mg/L；所述基本缓冲液包括MOPS缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠、氨基酸、丙氨酰‑谷氨酰胺、牛磺酸和四元羧酸乙二胺四乙酸。本发明的配子缓冲液可以发挥良好的清除自由基、保护配子细胞的作用，还可以促进配子细胞的有丝分裂和细胞发育。

技术领域

本发明涉及辅助生殖领域，特别是涉及一种配子缓冲液及其制备方法。

背景技术

辅助生殖技术是人类辅助生殖技术(Assisted Reproductive Technology，ART)的简称，指采用医疗辅助手段使不育夫妇妊娠的技术，包括人工授精(ArtificialInsemination，AI)和体外受精-胚胎移植(In Vitro Fertilization and EmbryoTransfer，IVF-ET)及其衍生技术两大类。其中体外受精-胚胎移植(IVF-ET)，是指将患者双方的配子取出后，在体外进行受精，再将受精卵或者胚胎移植回母体子宫内发育成胎儿，上面所述的配子即为人及哺乳动物进行有性生殖时由生殖系统所产生的成熟性细胞，简称生殖细胞。配子分为雄配子(male gamete)和雌配子(female gamete)，雌配子通常称为卵细胞(ova或egg)，而将雄配子称为精子(sperm)。

配子的采集和准备是辅助生殖中涉及体外操作很重要的一环，体外操作环境的变化和波动会严重影响配子的活力，进而影响到后续的受精卵及胚胎的发育质量。因此体外操作中的配子缓冲液极为重要。配子缓冲液可以维持配子细胞的新陈代谢，减轻应激效应对配子的影响，从而为受精做好准备。

在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中，卵母细胞的质量是获得良好子代胚胎的关键，线粒体是决定卵母细胞质量的核心因素之一。线粒体的数量、分布及mtDNA拷贝数对于卵母细胞的发育成熟、受精后的胚胎发育潜能都起到决定性作用。线粒体是人体细胞中制造能量的细胞器，它在利用氧分子的同时也不断受到外界氧毒性的伤害，线粒体产生能量供卵母细胞分裂时染色体均等分离，同时会释放大量的自由基，当线粒体损伤超过一定限度，细胞就会衰老死亡。

目前，配子缓冲液主要是一种含有抗菌素、基础离子以及各种丰富能量物质的缓冲液，其多采用添加MOPS(3-(N-吗啉)丙磺酸)、HEPES(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸)或碳酸氢钠-二氧化碳缓冲对，以上缓冲液主要是为配子提供合适的体外操作的环境及pH值，从而减少体外操作环境的变化和波动对配子活力的影响。但是，上述方法对于提高配子的质量以及提高IVF-ET的成功率所起的作用十分有限，仍然需要进一步探索其他可以高效提高配子的质量的配子缓冲液。

发明内容

基于此，本发明的目的之一是提供一种配子缓冲液，其可以发挥良好的清除自由基、保护配子细胞的作用，还可以促进配子细胞的有丝分裂和细胞发育。

具体技术方案如下：

一种配子缓冲液，所述配子缓冲液包括基本缓冲液和添加物；以在所述基本缓冲液中的添加量计，所述添加物包括以下组分：

褪黑素 0.01～100nmol/L；

辅酶Q10 0.5～2.0mg/L；

所述基本缓冲液包括MOPS缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠、氨基酸、丙氨酰-谷氨酰胺、牛磺酸和四元羧酸乙二胺四乙酸；

所述葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠、氨基酸、丙氨酰-谷氨酰胺、牛磺酸和四元羧酸乙二胺四乙酸的摩尔比为0.1～6：1～22：0.01～1.1：0.07～4.2：0.1～2.2：0.01～0.6：0.001～0.05。

本发明的另一目的是提供一种上述的配子缓冲液的制备方法，包括以下步骤：