[发明专利]一种NAD+

权利要求书

1.一种生产葡萄糖酸的方法，其特征在于，所述方法包括：

将NAD⁺-琼脂糖复合物加入戊二醛溶液中，然后向其中加入葡萄糖脱氢酶和乳酸脱氢酶进行反应，NAD⁺-葡萄糖脱氢酶-乳酸脱氢酶固定于琼脂糖上，形成三酶复合体系，利用该三酶复合体系生产葡萄糖酸；

其中，所述NAD⁺-琼脂糖复合物由改性NAD⁺与改性琼脂糖凝胶复合得到；

所述改性NAD⁺具体为c6-羧甲基NAD⁺；

所述改性琼脂糖凝胶具体采用环氧氯丙烷法活化琼脂糖凝胶制备得到；

具体的，所述NAD⁺-琼脂糖复合物，其制备方法包括：改性NAD⁺的制备；

改性琼脂糖凝胶的制备；

向改性NAD⁺中加入偶联剂后再加入改性琼脂糖凝胶即得；

所述向改性NAD⁺中加入偶联剂后再加入改性琼脂糖凝胶的步骤具体方法为：调整c6-羧甲基NAD⁺水溶液pH至中性，加入偶联剂后进行反应，然后再加入改性活化后的琼脂糖凝胶加热进行交联反应；

所述偶联剂为EDC与NHS的混合物。

2.如权利要求1所述的生产葡萄糖酸的方法，其特征在于，

戊二醛质量分数为2-3％，浸泡时间为20-60min，所述NAD+-琼脂糖复合物与葡萄糖脱氢酶和乳酸脱氢酶的质量酶活比为1g:10-15U:120-180U。

3.如权利要求2所述的生产葡萄糖酸的方法，其特征在于，戊二醛质量分数为2.5％，浸泡时间为30min；所述NAD+-琼脂糖复合物与葡萄糖脱氢酶和乳酸脱氢酶的质量酶活比为1g:12U:150U。

4.如权利要求1所述的生产葡萄糖酸的方法，其特征在于，改性NAD⁺的制备方法具体为：

1)向NAD⁺水溶液中加入环氧氯丙烷加热得n1-羧甲基-NAD⁺；

2)在n1-羧甲基-NAD⁺水溶液中加入硫代硫酸钠溶液，调节pH至碱性加热得到n1-羧甲基-NADH，同时强碱条件下发生Dimroth重排得到n6-羧甲基NADH；

3)加入甲醛加热反应，得c6-羧甲基NAD⁺。

5.如权利要求4所述的生产葡萄糖酸的方法，其特征在于，

所述步骤1)中，加热反应为水浴加热，水浴反应条件为在60～80℃条件下反应0.5～3h；

所述步骤2)中，pH调节至强碱性，加热反应为水浴加热；

所述步骤3)中，加热反应为水浴加热。

6.如权利要求5所述的生产葡萄糖酸的方法，其特征在于，

所述步骤1)中，水浴反应条件为70℃水浴反应1h；

所述步骤2)中，pH调节为10-11，水浴反应条件为在60～80℃条件下反应0.5～3h；

所述步骤3)中，水浴反应条件为在60～80℃条件下反应0.5～3h。

7.如权利要求6所述的生产葡萄糖酸的方法，其特征在于，

所述步骤2)中，水浴反应条件为70℃水浴反应1h；

所述步骤3)中，水浴反应条件为70℃水浴反应1h。

8.如权利要求1所述的生产葡萄糖酸的方法，其特征在于，

改性琼脂糖凝胶的制备方法具体为：

向琼脂糖凝胶中加入环氧氯丙烷后加入碱液在室温下反应即得。

9.如权利要求8所述的生产葡萄糖酸的方法，其特征在于，所述琼脂糖凝胶质量分数控制为0.5～2％，所述碱液为NaOH，所述反应具体条件为：在室温下反应1～10h。