[发明专利]明胶作为重组家蚕乙酰胆碱酯酶保护剂的应用

说明书

本发明公开了明胶作为重组家蚕乙酰胆碱酯酶保护剂的应用，本发明利用明胶作为重组家蚕乙酰胆碱酯酶的保护剂，其能够很好的保持重组家蚕乙酰胆碱酯酶的酶活，利用其制备了纯高稳定性的重组家蚕乙酰胆碱酯酶液体制剂和冻干粉制剂，其储存稳定性显著优于无保护剂的酶制剂。该两种含有保护剂的酶制剂对于重组家蚕乙酰胆碱酯酶在酶法检测农药残留的实际应用具有重大意义和推广价值。

技术领域

本发明涉及酶法检测农药残留领域，更具体的，涉及明胶作为重组家蚕乙酰胆碱酯酶保护剂的应用。

背景技术

乙酰胆碱酯酶是酶法检测农药残留的核心试剂，是一种丝氨酸水解酶，因其能够被有机磷类和氨基甲酸酯类农药抑制而被应用于对食品、农产品的农药残留检测中。被抑制后的酶会失去对底物水解的能力，导致显色剂颜色变化减弱，因此可以计算出待测样品中的农药残留量。酶法检测具有广谱和速效的特点，广泛应用于农产品农药残留的现场初筛。乙酰胆碱酯酶广泛存在于电鳐、电鳗、人、家蝇、果蝇、家蚕等动物、昆虫的血液或组织中。其中家蚕由于长期人工圈养而对农药具有高敏感性，其乙酰胆碱酯酶的研究也受到关注。获取乙酰胆碱酯酶的途径主要包括直接提取和基因工程重组表达，目前应用较多的为直接提取，其弊端在于提取率低、纯化程度差、酶灵敏度各异，在农药残留检测的实际应用中往往容易造成灵敏度低、假阳性等各种问题。相较之下，利用不同的表达系统进行乙酰胆碱酯酶的重组表达有助于获取大量、廉价的酶源，同时可以通过加入标签蛋白进行亲和纯化，获得的纯化酶纯度高、活性好，利于进一步的研究和应用。

酶的稳定性包括热稳定性和储存稳定性是影响其实际应用的重要因素之一，提高酶的稳定性方法多种多样，包括分子进化、添加保护剂或分子伴侣、化学修饰以及固定化处理等。添加保护剂是最为便捷、廉价和实用的方法，常用的保护剂包括醇类、糖类、盐类、聚合物、有机溶剂等。通过筛选针对目标酶的保护剂类型，可以开发单一型或复合型保护剂，有效提高酶的稳定性。酶制剂的类型通常有液体制剂和冻干粉制剂。酶的液体制剂制备、储存和使用方便，避免了冻干和复溶时对酶造成的损害和损失，但液体酶制剂容易出现结构损坏、聚集、降解等不良情况。配合保护剂将酶制备成冻干粉制剂，能够使酶的结构保持稳定，提高酶在不同温度下的储存稳定性。

在重组家蚕乙酰胆碱酯酶用于农药残留检测的研究中，该酶的活性和灵敏度较好，但其稳定性差造成了应用和储藏的不便，限制了其实际应用。目前尚未有一种针对重组家蚕乙酰胆碱酯酶的保护剂，制约了其的应用。因此，针对该酶进行保护剂的筛选研究具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供明胶作为重组家蚕乙酰胆碱酯酶保护剂的应用。

本发明的第一个目的在于提供明胶作为重组家蚕乙酰胆碱酯酶保护剂的应用。

本发明的第二个目的在于提供明胶在制备高稳定性乙酰胆碱酯酶液体制剂中的应用。

本发明的第三个目的在于提供明胶在制备高稳定性乙酰胆碱酯酶冻干粉制剂中的应用。

本发明的第四个目的在于提供一种高稳定性重组家蚕乙酰胆碱酯酶液体制剂。

本发明的第五个目的在于提供一种高稳定性重组家蚕乙酰胆碱酯酶冻干粉制剂。

本发明的上述目的是通过以下方案予以实现的：

明胶作为重组家蚕乙酰胆碱酯酶保护剂的应用。

优选地，明胶的工作浓度为1～10g/L。

优选地，明胶的工作浓度为5g/L。

优选地，所述重组家蚕乙酰胆碱酯酶为由以下方法制备得到：毕赤酵母分泌表达的重组家蚕乙酰胆碱酯酶上清液作为粗酶液，经Ni亲和层析进行纯化，并置换至50 mM磷酸盐缓冲液中。

更优选地，所述重组家蚕乙酰胆碱酯酶保护剂保护酶活。

本发明还要求保护以下内容：