[发明专利]一种特异性识别百草枯的纳米抗体Nb2-37及其应用

说明书

本发明公开了一种特异性识别百草枯的纳米抗体Nb2‑37及其应用。本发明通过用噬菌体展示技术，从羊驼免疫抗体文库中筛选得到能与百草枯特异性结合的纳米抗体Nb2‑37，所述纳米抗体Nb2‑37的VHH的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。该纳米抗体Nb2‑37具有良好的热稳定性以及优异的有机溶剂耐受性，在实际样品检测的前处理过程中不会受到有机溶剂的影响，检测结果准确度高；利用该纳米抗体Nb2‑37检测百草枯时，对百草枯的检测范围为0.17～8.66ng/mL，半抑制浓度(IC50)为1.23ng/mL，最低检测限(LOD)为0.059ng/mL，检测特异性强、灵敏度高，且操作简单、所耗时间较短；因此，该纳米抗体Nb2‑37在检测百草枯、以及制备百草枯检测试剂/试剂盒方面均具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域。更具体地，涉及一种特异性识别百草枯的纳米抗体Nb2-37及其应用。

背景技术

百草枯是一种联吡啶类的灭生性除草剂，因其具有活性佳、杀草谱广、防效好、见效快等特点广泛应用于农田间除草、能杀灭大部分禾本科及阔叶杂草，绿叶接触药液数小时后便开始枯死。药液接触土壤后能被土壤胶体迅速、强烈吸附，并完全钝化而不影响作物根部。但是百草枯在土壤中有极强的吸附作用而在土壤中产生残留，并对水资源产生严重污染，且百草枯对人毒性极大，研究表明，百草枯的残留可能会导致肺纤维化，皮肤若长时间接触百草枯，或短时间接触高浓度百草枯，特别是破损的皮肤等均可导致全身中毒。这就要求对除草剂生产以及食品中百草枯残留量进行严格监测，以保护消费者的身心健康。目前已被多个国家禁止或者严格限制使用，最新《农药管理条例》规定百草枯可溶胶剂从2020年9月26日起禁止使用，百草枯全面禁止使用；最新国标GB2763-2019限量要求更为苛刻，提升至0.005mg/kg。因此，需要一种快速、灵敏、高效的检测方法来实现对百草枯的快速检测。

现有检测百草枯的方法有：气相色谱-质谱法、液相色谱质谱联用法、紫外分光光度法、以及其他定量检测方法。高效液相色谱分析法、气相色谱等仪器分析方法其样本前处理及测定过程繁琐，费用高，需要专业人员操作，不适于大量样本筛查。而酶联免疫吸附检测法具有灵敏度高、特异性强、仪器设备要求低和样本前处理相对简单等优点，适于市场监测和现场监控。

目前，免疫学检测主要以单克隆抗体和多克隆抗体为主。虽然单克隆抗体和多克隆抗体具有快速、灵敏、高通量的优势，但是在极端条件下抗体稳定性变差，容易失活，且在实际样品检测前，对样品的前处理过程需要用到有机溶剂，而有机溶剂的残留使得以单克隆抗体和多克隆抗体为主的免疫学检测的灵敏度、准确度大大降低。因此，亟需提供一种检测结果准确度高、灵敏度强、稳定性好的快速检测百草枯的方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有百草枯检测方法的缺陷和不足，提供一种特异性识别百草枯的纳米抗体Nb2-37及其应用。

本发明的目的是提供一种特异性识别百草枯的纳米抗体Nb2-37。

本发明另一目的是提供一种编码所述纳米抗体Nb2-37的基因。

本发明又一目的是提供一种重组载体。

本发明再一目的是提供一种重组细胞。

本发明再一目的是提供所述纳米抗体Nb2-37、所述基因、所述重组载体或所述重组细胞在检测百草枯中的应用。

本发明再一目的是提供所述纳米抗体Nb2-37、所述基因、所述重组载体或所述重组细胞在制备百草枯检测试剂/试剂盒中的应用。

本发明再一目的是提供一种检测百草枯的方法。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

本发明首先提供了一种特异性纳米抗体Nb2-37，所述纳米抗体Nb2-37的VHH的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。