[发明专利]注射用胶原酶应用于SVF的制备及SVF的制备方法

说明书

本发明提出了一种注射用胶原酶应用于SVF的制中及SVF的制备方法。其制备包括：(1)漂洗人体脂肪，得到漂洗后的人体脂肪；(2)将漂洗后的人体脂肪置于容器中，在所述容器中加入胶原酶原液及生理盐水；(3)置于摇床中，37℃温度下消化；(4)将步骤(3)摇床培养后的容器离心，在无菌环境下吸出上层清液，在下层中加入生理盐水重悬，过滤；(5)滤渣离心洗涤，下沉细胞团即为SVF。本发明将注射用胶原酶应用于SVF的制备中，提供了注射用胶原酶的新用途；该注射用胶原酶为已批准的可以用于人体的药剂，无任何其他化学添加。制备SVF的方法中注射用胶原酶用量较低，制备得到的的SVF中胶原酶含量0.001U/ml。

技术领域

本发明涉及胶原酶应用领域，特别是指一种注射用胶原酶应用于SVF的制备及SVF的制备方法。

背景技术

目前，脂肪组织因其在能量调控、炎症反应和免疫应答方面的作用已被认为是一个内分泌器官。此外，它还是具有多向分化潜能的多功能细胞的来源之一，而这种多功能细胞就存在于脂肪组织的血管基质部分中。脂肪组织中的血管基质片段(SVF)是脂肪组织经胶原酶消化、过滤、离心除去成熟脂肪细胞后得到的。正因为SVF易于从脂肪组织中提取并含有丰富的、可塑性极强的脂肪组织来源的间充质干细胞(Adipose tissue-derivedmesenchymal stem cells，ASC),所以对SVF的提取和制备是有必要进行研究的。SVF代表一组异质性的细胞群，在脂肪组织中它们围绕在脂肪细胞的周围，其功能包括：1)体内参与血管生成2)多功能干细胞的储存库，在脂肪、骨以及软骨的重建中具有重要作用3)内分泌功能：具有能量调控、炎症反应以及免疫应答功能。

SVF的细胞组分主要包括以下几种：

(1)内皮组细胞：CD45-/CD31+/CD34+/CD133+

(2)内皮细胞：CD31+/CD34-/CD133-

(3)周细胞：CD146+/CD45-/CD31-

(4)SA-ASC(脂肪前体细胞)：CD34+/PDGFRα+/CD45-/CD31-

(5)造血干细胞：CD45+/CD31-/CD146-/CD34-/CD206+/CD14-

(6)ADSC：CD45-/CD31-/CD44+/CD90+/CD73+/CD36+/CD106-

(7)单核细胞：CD14+/CD16+

(8)I巨噬细胞：CD14+/CD45+/CD206-/CD86+

II巨噬细胞：CD14+/CD45+/CD206+/CD163+/CD68+

在临床多个领域都有巨大的潜在应用空间，国内外均有大量相关的基础及临床实验研究，目前干细胞治疗在整形外科、心脏科、血管外科、烧伤科、消化科、血液科、风湿免疫科等领域都有相关临床应用开展。但是，对于SVF的提取和制备就现有技术而言，还存在以下不足：实验室所用胶原酶属于生物制剂不能应用于人体。胶原酶在SVF提取物中的残留量能否达到人体安全可接受的范围亦不明确。

发明内容

本发明提出一种注射用胶原酶应用于SVF的制备及SVF的制备方法，解决了现有技术中实验室用胶原酶无法应用于人体的问题。

本发明的技术方案是这样实现的：

注射用胶原酶应用于SVF的制备。

进一步的，所述的注射用胶原酶为用于治疗椎间盘突出髓核的制剂。在一些实施例中，所述注射用胶原酶制成用于消化的胶原酶溶液，具体过程为：在600单位注射用胶原酶中加入2ml生理盐水，充分混合，即得。

一种SVF的制备方法，包括：